小鼠尿液葡萄糖浓度定性与定量检测方法

摘要

来源：
Tumininu S. Faniyan¹, Dennis J. Samuel¹, Kavaljit Chhabra<sup>1

1</sup>罗切斯特大学医学中心。

本视频演示了收集小鼠尿液并检测其葡萄糖水平的操作流程。为评估葡萄糖浓度，将涂有酶和显色染料的试纸条浸入样本中，引发颜色变化，从而指示葡萄糖水平。为定量测定尿液中的葡萄糖浓度，将尿液样本加入含梯度升高葡萄糖浓度的多孔板中，加入反应混合液后孵育。测定吸光度以绘制标准曲线，并根据样本的吸光度计算葡萄糖浓度。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 随机尿液葡萄糖检测

1. 将一块干净的封口膜平放在平坦的表面上。
2. 轻轻抓住小鼠尾巴，将其放置在封口膜上。
3. 用拇指和食指捏住小鼠颈背部皮肤以固定小鼠。在固定颈背部皮肤的同时轻轻提起小鼠，使其因应激反应而排尿。让一滴尿液滴落在封口膜表面。收集尿液后，将小鼠放回笼中。
4. 将Diastix试纸的试剂端浸入封口膜上收集的新鲜尿液滴中。立即取出试纸，平放在表面上，确保显色面朝上。至少等待30秒，使试纸充分显色。将显色结果与Diastix容器上提供的比色卡进行比对（图 1）。
   提示：如果小鼠未在封口膜上排尿，可用食指轻轻按压小鼠下腹部（膀胱区域），有助于尿液滴出至封口膜。对于按上述操作后仍未排尿的小鼠，等待20分钟后重复操作。所有操作均需严格遵守IACUC指南。

2. 使用小鼠代谢笼收集24小时尿液

1. 根据制造商的说明组装 Tecniplast 代谢笼 (图 2)。
2. 将粉末状饲料装入饲料组件中，然后将饲料组件固定到上室相应的金属卡扣上。
3. 将水瓶支架固定到上室剩余的金属卡扣上。
4. 将空水瓶装满水，然后将其滑入支架中，确保吸水管插入孔内。
5. 将一只小鼠放入代谢笼中，然后盖上笼盖。
6. 确保笼盖安装到位。
7. 将尿液收集管和粪便收集管分别放置在下室底部的相应位置。
8. 24 小时后，取出尿液收集管并进行葡萄糖检测，以测定尿液中的葡萄糖浓度。若当天无法完成葡萄糖检测，应将尿液样本置于 -80°C 冰箱中冷冻保存。

3. 24小时尿液葡萄糖浓度的测定

1. 如果尿液样本保存在 -80°C，应在进行葡萄糖检测前让样本解冻。
2. 根据检测试剂盒说明书，从 100 mg/dl 的储备液中配制八种浓度范围为 25 mg/dl 至 0 mg/dl 的标准品。
3. 按照试剂盒说明书，在 96 孔板中设置标准品孔和尿液样本孔，所有孔均设复孔。
4. 向各孔加入推荐量的酶混合液启动反应后，盖上板子，并在 37°C 下孵育 10 分钟。
5. 使用酶标仪在 500–520 nm 波长处读取吸光度。
6. 根据检测试剂盒说明书分析数据。绘制每个标准品的吸光度与其葡萄糖浓度的关系曲线，并利用该曲线确定 24 小时尿液样本中的葡萄糖浓度。

结果

图 1.随机尿糖检测。在 Parafilm 上收集的小鼠尿滴剂和 Diastix 容器上提供的颜色参考图表。

图 2.用于 24 小时小鼠尿液收集的 Tecniplast 代谢笼。将小鼠单独饲养在这个笼子中以收集 24 小时的尿液。