利用阳离子聚合物增强自然杀伤细胞中的病毒转导

摘要

来源：Nanbakhsh, A.，等。右旋糖酐提高小鼠和人原代自然杀伤细胞的慢病毒转导效率。J. Vis. Exp. (2018)。

本视频展示了一种用于评估阳离子聚合物介导的自然杀伤（NK）细胞病毒转导的实验方法。将细胞与编码荧光蛋白的转基因慢病毒载体共同孵育。加入阳离子聚合物可促进病毒与细胞结合，并将其RNA整合到宿主基因组中，从而表达荧光蛋白。通过定量荧光信号来评估聚合物对转导效率的增强作用。

方案

1. 用慢病毒转导小鼠和人原代NK细胞

1. 将小鼠或人原代 NK 细胞悬浮于 24 孔板中，培养基浓度为 0.5 × 10⁵/mL，同时加入绿色荧光蛋白（GFP）慢病毒上清液，感染复数（MOI）分别为 5、10 和 20，并分别加入 Pb（8 µg/mL）、PS（8 µg/mL）或葡聚糖（8 µg/mL）。
2. 将培养板在 1,000 × g 条件下离心 60 分钟。
3. 不倾去上清液，将细胞在 37 °C、含 5.2% CO₂ 的培养箱中过夜培养（16–18 小时）。
4. 用 10 mL 磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤一次，重悬于 2 mL 完全 Roswell Park Memorial Institute（RPMI）1640 培养基中，并加入白细胞介素 2（IL-2，300 U/mL）。
5. 在第 7 天轻轻敲击培养瓶，收集转导后的 NK 细胞。
   1. 通过在 96 孔高蛋白吸附性聚苯乙烯板上包被 2.5 µg/mL 抗自然杀伤细胞受体 2D（NKG2D）单克隆抗体（A10）过夜，制备固相抗体，随后用滴定浓度的板结合抗 NKG2D 单克隆抗体激活收集的细胞。
   2. 加入原代 NK 细胞前，每孔用 100 µL 磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤三次。
6. 在激活后 16 至 18 小....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
右旋糖酐	Sigma-Aldrich	90-64-91-9
聚凝胺（Pb）	Sigma-Aldrich	TR-1003
硫酸鱼精蛋白（PS）	Sigma-Aldrich	p3369
RPMI1640	Corning	10-040-CV
干扰素γ（IFN-γ）	eBioscience	14-7311-85
碘化丙啶染色液	BD	51-66211E
Lipofectamine 3000	Thermo Fisher	L3000015
异氟烷	PHOENIX	NDC 57319-559-05
293T 细胞	ATCC	CRL-3216
T75 培养瓶	Corning	430641U
ELISA 试剂盒	Ebioscience	00-4201-56