分离脐带血造血干细胞以制备人免疫系统小鼠

摘要

来源：Lanis, J. M.，等。在携带人类肿瘤的人源化小鼠模型中测试癌症免疫治疗药物。J. Vis. Exp. (2022)

本视频展示了一种构建人免疫系统（HIS）小鼠模型的技术。从人脐带血富集层细胞中，使用抗体包被的磁珠分离出 CD34⁺ 造血干细胞（HSCs）。CD34⁺ HSCs 在富含细胞因子的生长培养基中进行扩增，并进行冷冻保存。最后，将解冻后的 HSCs 注射到免疫缺陷小鼠幼鼠体内，以建立 HIS 小鼠模型。

方案

所有涉及样本采集的程序均按照本机构的IRB指南进行。所有涉及动物模型的程序均已通过当地机构动物护理委员会和JoVE兽医审查委员会的审核。

1. 人源化免疫系统小鼠的制备

1. BALB/c小鼠的饲养管理Rag2^null Il2RγC^null Sirpα^NOD (BRGS) 小鼠
   注意： 该品系免疫缺陷极为严重，缺乏T细胞、B细胞和自然杀伤（NK）细胞。因此，必须采取严格措施以防止机会性感染。将动物群维持在含有甲氧苄啶和磺胺嘧啶的饲料上，与正常饲料每两周交替一次。饲养于最高级别的防护屏障环境中（例如，设有淋浴间进入的屏障设施，且限制人员进出）。
   1. 维持 BALB/c 品系小鼠群体Rag2^null Il2RγC^null Sirpα^NOD (BRGS) 和 BALB/c Rag2^null Il2RγC^null Sirpa^Balb/c 使用 (BRG) 纯合小鼠作为繁殖种鼠。
   2. Breed BRGS^N/N×BRG^B/B 以生成BRGS^B/N

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
带针头的 1 mL 注射器	McKesson	1031815
15 mL 离心管	Grenier Bio-One	188271
2-巯基乙醇	Sigma	M6250
50 mL 离心管	Grenier Bio-One	227261
AutoMACS Pro 分选仪	Miltenyi	130-092-545
BSA	Fisher Scientific	BP1600100
Chill 15 冷却架	Miltenyi	130-092-952
胚胎干细胞 FCS	Gibco	10439001
Eppendorf 管；1.5 mL 容量	Grenier Bio-One	616201
Excel	Microsoft
FBS	Benchmark	100-106 500mL
Ficoll Hypaque	GE Healthcare	45001752
玻璃移液管	DKW Life Sciences	63A53
含 Ca & Mg 的 HBSS	Sigma	55037C
MultiRad 350	Precision X-Ray
PBS	Corning	45000-446
PRISM	Graphpad
重组人 FLT3L	R&D systems	308-FK-005/CF
重组人 IL6	R&D systems	206-IL-010/CF
重组人 SCF	R&D systems	255SC010
25 mL 血清移液管	Fisher Scientific	1367811
无菌滤器	Nalgene	567-0020
无菌分子用水	Sigma	7732-18-5
Yeti 细胞分析仪	Bio-Rad	12004279