小鼠皮下不完全切除肿瘤模型中的辅助治疗方案

摘要

来源：Rwandamuriye, F. X. 等，用于测试（新）辅助治疗的不完全切除软组织肉瘤小鼠模型。J. Vis. Exp. (2020)

本视频展示了在皮下肿瘤未完全切除的小鼠模型中，测试辅助治疗或附加疗法的效果。对部分肿瘤切除的小鼠给予靶向调节性T细胞抗细胞毒性蛋白的抗体治疗，可能减少肿瘤再生长，提示该疗法具有有效的辅助治疗潜力。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 细胞接种

1. 细胞与动物的准备
   1. 确保细胞系在推荐的培养基中维持培养。例如，将 WEHI 164 细胞系维持在 Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 培养基中，该培养基需添加 2 mM L-谷氨酰胺、10% 胎牛血清、20 mM 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸 (HEPES)、0.05 mM 2-巯基乙醇、100 U/mL 青霉素和 100 µg/mL 链霉素。
      注意：细胞从低温保存中复苏后，至少传代 3 次，最多可传代 5 次。为确保最佳细胞活力，应在细胞融合度达到 70–80% 时进行传代。肿瘤细胞系应检测支原体污染，因为感染可能改变细胞生长特性并影响体内的免疫反应。
   2. 接种前一天，使用电动剃毛器剃除小鼠右下腹部的毛发。
      注意：本实验使用 8–12 周龄、体重正常（16–22 克）的雌性 BALB/c 小鼠。
   3. 接种当天，当 WEHI 164 细胞融合度达到 70–80% 时，通过胰酶消化收获细胞。
      1. 吸除组织培养瓶中的培养基，然后加入无菌磷酸盐缓冲液 (1× PBS)，以去除残留的....

结果

图1：手术设置的代表性图像。（A）手术设置的全景图，显示手术器械（见步骤2.1所列）和麻醉机。（B）手术台的局部图像，展示所有触手可及的材料。（C）用于小鼠恢复的加热舱和加热垫。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
26 号 0.5 mL 胰岛素注射器	Becton Dickinson, Australia	326769	无
2-巯基乙醇	Life Technologies Australia Pty Ltd	21985023	无
麻醉气体机	Darvall Vet, Australia	SKU: 2848	无
抗 CTLA-4 抗体	BioXcell, USA	BE0164	无
抗 PD-1 抗体	BioXcell, USA	BP0273	无
盐酸丁丙诺啡注射液，0.3 mg/mL	RB healthcare UK Limited, UK	55175	处方订购
氯己定外科洗手液 4%	Perigo Australia, Australia	CHL01449F(scrub	无
胎牛血清	CellSera, Australia	AU-FBS-PG	无
精细镊子 10.5 cm	Surgical house, Western Australia	CC74110	无
精细带齿镊子 12 cm	Surgical house, Western Australia	CC74212	无
Halsted 镊子 14 cm	Surgical house, Western Australia	CD01114	无
加热舱	Datesand Ltd, UK	Mini-Thermacage	无
HEPES (1 M)	Life Technologies Australia Pty Ltd	15630080	无
异氟烷	Henry Schein Animal Health, Australia	SKU: 29405	处方订购
润滑眼膏	Alcon	n/a	无
青霉素/链霉素 1000 倍	Life Technologies Australia Pty Ltd	15140122	无
磷酸盐缓冲液 10 倍	Life Technologies Australia Pty Ltd	70013-032	无
Reflex 7 mm 夹子	Able scientific, Australia	AS59038	无
Reflex 7 mm 伤口夹施夹器	Able scientific, Australia	AS59036	无
Reflex 伤口夹移除器	Able scientific, Australia	AS59037	无
啮齿类动物 Qube 麻醉呼吸回路	Darvall Vet, Australia	#7885	无
RPMI 1640 培养基 + L-谷氨酰胺（Roswell Park Memorial Institute）	Life Technologies Australia Pty Ltd	21870092	无
虹膜剪 STR 11 cm	Surgical house, Western Australia	KF3211	无
虹膜剪 STR 9 cm	Surgical house, Western Australia	JH4209	无
小型诱导舱	Darvall Vet, Australia	SKU: 9630	无
TrypLE express 1x	Life Technologies Australia Pty Ltd	12604-021	无