评估一种细菌免疫调节蛋白在小鼠模型中的抗肿瘤疗效

摘要

来源：Codolo, G. 等 疗效评估的 H. pylori 蛋白HP-NAP在原位小鼠模型中作为膀胱癌治疗工具的研究 视频实验杂志 (2015)

本视频展示了一种在小鼠膀胱癌模型中评估幽门螺杆菌中性粒细胞活化蛋白（Helicobacter pylori neutrophil-activating protein，简称 HP-NAP）抗肿瘤活性的技术。HP-NAP 与肿瘤细胞周围的中性粒细胞相互作用，促进促炎性细胞因子的产生，诱导初始 T 细胞分化为 1 型辅助性 T 细胞（Th1）和 1 型细胞毒性 T 细胞（Tc1）表型。Th1 和 Tc1 细胞分泌干扰素-γ，抑制肿瘤血管生成，并促进细胞毒性 T 细胞介导的肿瘤破坏，从而减小肿瘤体积。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 动物

1. 将 C57BL6/J 雌性小鼠在带微隔离过滤器的独立通风笼具中饲养至 8 周龄。
   注意：优先选用雌性小鼠，因其外泌尿生殖系统解剖结构使得导管插入操作较雄性更简便。

2. 细胞培养

1. 在添加了10%热灭活胎牛血清和50 µg/ml庆大霉素的RPMI 1640培养基中，于37 °C、湿润的含5%二氧化碳（CO₂）环境中培养小鼠膀胱移行细胞癌MB49细胞系。
2. 将MB49细胞在T-75培养瓶中培养至80%汇合度。消化后，重悬于150 μl磷酸盐缓冲液（PBS）中，细胞密度为0.5 × 10⁵ 至0.5 × 10⁶ 个细胞，用于小鼠体内移植。

3. 膀胱内肿瘤移植

1. 通过腹腔注射 zoletil 和 xylor 的混合麻醉剂（剂量分别为 33 mg/kg 和 20 mg/kg）对小鼠进行麻醉。
2. 将动物置于仰卧位，并....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
C57BL/6J 雌性小鼠	Harlan Italy (意大利乌迪内)
MB49 细胞			由美国爱荷华大学卡弗医学院 O'Donnel 教授提供，爱荷华，美国
RPMI	Sigma-Aldrich (美国密苏里州圣路易斯)	R8758
FBS	Sigma-Aldrich	F7524
PBS	Sigma-Aldrich	D1408	10X，需用无热原水稀释
细胞培养瓶	Becton Dickinson (美国新泽西州富兰克林湖)	353135
1 ml 注射器	Becton Dickinson	301358
胰蛋白酶	Life Technologies (美国马萨诸塞州沃尔瑟姆)
庆大霉素	Life Technologies	15710-049
Xilor	Bio 98 s.r.l. (意大利米兰)		2% 塞拉嗪
Zoletil	Virbac (法国卡罗斯)	3.59713E+11	5% 唑拉西泮 + 5% 替来他明
24G 导管	Terumo (意大利罗马)	SR+DM2419PX
HCl	Carlo Erba Reagents (意大利米兰)	403871	液体
NaOH	JT Baker (美国宾夕法尼亚州中心谷)	10095011	粉末