生成多价展示外膜囊泡疫苗

摘要

来源：Feng, R., 等. 一种基于展示 SARS-CoV-2 受体结合域的外膜囊泡的“即插即用”纳米颗粒疫苗平台。J. Vis. Exp. (2022)。

本视频展示了一种制备可展示多种抗原的外膜囊泡（OMV）疫苗的方法。首先，转染哺乳动物细胞，使其表达并分泌与SpyTag及多聚组氨酸标签融合的病毒抗原。随后，利用镍-次氮基三乙酸（Ni-NTA）亲和层析柱纯化这些抗原。将纯化后的抗原与表面表达SpyCatcher（SC）蛋白的外膜囊泡混合。多个抗原通过其SpyTag（ST）与SpyCatcher发生共价结合，从而在OMV表面展示抗原，形成多价疫苗。

方案

1. 质粒构建

1. 将编码 SpyCatcher 序列的 DNA（参见图1）插入氨苄青霉素抗性的 pThioHisA-Cytolysin A（ClyA）质粒（见材料表）的 BamH I 和 Sal I 位点之间，参照先前发表的文献构建质粒 pThioHisA ClyA-SC。
2. 将合成的 SpyTag-SARS-CoV-2 受体结合域（RBD）-多聚组氨酸标签（Histag）融合基因（参见图1）连接至 pcDNA3.1 质粒（见材料表）的 BamH I 和 EcoR I 位点之间，参照先前发表的文献构建质粒 pcDNA3.1 RBD-ST。

2. OMV-SC 的制备

1. 按照以下步骤进行ClyA-SC转化。
   1. 将5 µL pThioHisA ClyA-SC质粒溶液（50 ng/µL）加入50 µL BL21感受态菌中，轻轻吹打混匀，冰上静置30 min。
   2. 将混合液置于42 °C水浴中90 s，然后立即放回冰上冷却3 min。
   3. 向菌液中加入500 µL Luria-Bertani（LB）培养基，混匀后于37 °C、220 ....

结果

图1：本研究中使用的质粒序列。

....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
氨苄青霉素钠	Sangon Biotech	A610028
自动细胞计数仪	Countstar	BioTech
BCA 蛋白定量试剂盒	cwbio	cw0014s
电泳装置	Cavoy	Power BV
高速冷冻离心机	Bioridge	H2500R
His-Tag 小鼠单克隆抗体	Cell signaling technology	2366s
咪唑	Sangon Biotech	A600277
异丙基-β-D-硫代半乳糖苷	Sangon Biotech	A600118
Ni-NTA His-Bind Superflow	Qiagen	70691
OPM-293 细胞培养基	Opm biosciences	81075-001
pcDNA3.1 RBD-ST 质粒	Wuhan genecreat biological techenology
磷酸盐缓冲液	ZSGB-bio	ZLI-9061
线性聚乙烯亚胺	Polysciences	23966-1
预染蛋白 Marker	Thermo	26616
pThioHisA ClyA-SC 质粒	Wuhan genecreat biological techenology
Quixstand 台式系统（100 kD 中空纤维柱）	GE healthcare
SDS-PAGE 上样缓冲液 (5x)	Beyotime	P0015
氯化钠	Sangon Biotech	A100241
悬浮仪	Life Technology	Hula Mixer
胰蛋白胨	Oxoid	LP0042B
超速离心机	Beckman coulter	XPN-100
紫外分光光度计	Hitachi	U-3900
酵母提取物	Sangon Biotech	A610961