一种带血管异位脾脏移植的小鼠模型

摘要

来源：Wang, J., 等 用于研究脾细胞生物学与移植免疫的带血管异位脾移植小鼠模型。 J. Vis. Exp. (2019)。

该视频演示了一种建立血管化异位脾移植小鼠模型的外科手术方法。通过外科手术打开麻醉供体小鼠的腹腔以摘除脾脏。识别下腔静脉和肾下主动脉，结扎其腰支，在受体小鼠体内建立异位移植位点用于移植同系供体小鼠的脾脏。完成血管吻合并恢复移植脾脏的血流后，关闭切口并监测小鼠的恢复情况。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 外科准备、麻醉与镇痛方案

1. 将无菌一次性手术单（45.7 cm × 66 cm）铺在手术台上。轻轻抓取小鼠，腹腔注射（i.p.）给予氯胺酮（50 mg/kg）和赛拉嗪（10 mg/kg）进行麻醉，并皮下注射0.05 mg/kg丁丙诺啡以镇痛。
2. 通过夹捏脚趾法确认麻醉深度，用剃刀剃除整个腹部区域的毛发，并将小鼠置于手术显微镜下（6–10倍放大）的无菌手术台上。

2. 供体脾脏采集

1. 用酒精消毒片对腹部进行消毒，用手术胶带固定四肢，用剪刀从耻骨至剑突处做一条3-4 cm的正中垂直皮肤切口。
2. 使用回形针制成的无菌牵开器牵开腹壁，用无菌棉签将肠管移至腹部右侧（术者左侧）以暴露脾脏。使用无菌低温电凝器凝固附着于脾脏的胃短静脉（图1A）。将一块浸有37 °C生理盐水的无菌纱布覆盖在脾脏上以保持其湿润（图1B）。
3. 通过结扎门静脉的分支（胰十二指肠上静脉和胃右静脉），将门静脉从胰腺组织中分离并游离出来（图1C）；在远离脾静脉处的门静脉上放置缝线（

结果

图1：供体脾脏切取。（A）电凝与脾脏相连的胃短静脉。（B）将一小块无菌温湿纱布覆盖于脾脏表面以保持其湿润。（C）解剖并分离胰腺后方的门静脉。（D）结扎门静脉的侧支，并在脾静脉远端的门静脉周围放置缝线。虚线表示后续横断的位置，用于与受体下腔静脉进行吻合。（E）将脾脏翻转至腹腔右侧（术者左侧），以暴露腹腔干及其分支（包括脾动脉）和主动脉。（F）通过结扎另外两个分支，解剖并游离腹主动脉—腹腔干—脾动脉。（G）在腹腔动脉近端的主动脉周围放.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
氯胺酮	Wyeth	206205-01
赛拉嗪	Lloyd Laboratories	139-236
肝素溶液	Abraxis Pharmaceutical Products	504031
注射级生理盐水	Hospira Inc.	NDC 0409-4888-20
70% 乙醇	Pharmco Products Inc.	111000140
ThermoCare 小动物重症监护系统	Thermocare, Inc.
艾德森镊	Roboz Surgical Instruments	RS-5230
德鲁夫持针器	Roboz Surgical Instruments	RS-7822
超精细显微解剖剪	Roboz Surgical Instruments	RS-5881
微型夹	Roboz Surgical Instruments	RS-5420
7-0 丝线	Braintree Scientific	SUT-S 103
11-0 尼龙线，带 4 mm (3/8) 针	Sharpoint DR4	AK-2119
小鼠 CD45.2 抗体	BD Bioscience	553772
小鼠 CD45.1 抗体	BD Bioscience	553776
小鼠 CD11b 抗体	BD Bioscience	557657
小鼠 B220 抗体	BD Bioscience	553089
小鼠 Ly6C 抗体	eBioscience	48-5932-80
小鼠 Ly6G 抗体	BD Bioscience	561236
小鼠 F4/80 抗体	BD Bioscience	565614
小鼠 CD11c 抗体	BD Bioscience	558079
小鼠 CD3 抗体	eBioscience	48-0032-82
小鼠 CD4 抗体	BD Bioscience	552051
小鼠 CD8 抗体	BD Bioscience	563786
LIVE/DEAD™ 可固定紫红色死细胞染色试剂盒	Thermo Fisher	L34955