小鼠模型中通过鼻内免疫接种卡介苗

摘要

来源：Uranga, S. 等，小鼠皮下与鼻内接种卡介苗后的保护效果及肺部免疫应答 J. Vis. Exp. (2016)

本视频展示了在小鼠中进行的鼻内BCG免疫接种，可激活先天性和适应性免疫反应，促进肺组织驻留记忆T细胞和效应B细胞的形成，从而增强对分枝杆菌（Mycobacterium）感染的防护作用。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 丹麦株卡介苗（BCG）定量甘油菌种的制备 结核分枝杆菌 H37Rv

注意： 所述所有实验方案均在生物安全等级3级（BSL3）条件下进行。

1. 解冻BCG Danish或H37Rv菌株的甘油冻存菌种，取100 μl接种于10 ml含0.05%（v/v）Tween-80和10%（v/v）ADC（白蛋白、葡萄糖、过氧化氢酶）的7H9培养基中。
2. 在37 °C静置培养一周，直至菌液进入对数生长期。
3. 将10 ml培养物转接至200 ml新鲜培养基中扩大培养，在静置条件下继续培养20天。
4. 将菌液转移至50 ml离心管中，以2500 × g离心15分钟。
5. 弃去上清液，用残留液体重悬菌体沉淀，每管加入无菌的3 mm直径玻璃珠（每管10–15颗）。
6. 剧烈涡旋震荡1分钟以充分分散细菌团块，将每管沉淀重悬于10 ml含0.05%（v/v）Tween-80的磷酸盐缓冲液（PBS）中。
7. 静置10分钟，使较大的细菌聚集体和玻璃珠充分沉降。
8. 从4个离心管中各取9.5 ml上清液（含较小菌团和单个细菌....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Middlebrook 7H9 肉汤	BD	271310
Middlebrook ADC 增补剂	BD	211887
Tween 80	Scharlau	TW00800250
直径 3 mm 玻璃珠	Scharlau	038-138003
Middlebrook 7H10 琼脂	BD	262710
1 ml 注射器，26G 0.45×10 mm	BD	301358
C 管	Miltenyi Biotec	130-093-237
M 管	Miltenyi Biotec	130-093-236
LACHRYMAL OLIVE LUER LOCK 0.60 × 30 mm，23G × 1 1/4"	UNIMED	27.134	用作支气管肺泡灌洗的气管插管
牛血清白蛋白	Sigma	A4503