使用亲和层析纯化自组装蛋白质纳米颗粒

Abstract

来源:Karch， CP et al.， 生产大肠杆菌表达的自组装蛋白纳米颗粒，用于需要三聚体表位呈递的疫苗。J. Vis. Exp. （2019 年）

该视频展示了使用亲和液相色谱法纯化组氨酸标记的自组装蛋白质纳米颗粒或 SAPN。所得纯化的 SAPN 组分适用于疫苗开发，有望用于潜在的免疫治疗应用。

Protocol

1. 含有六螺旋束 （SHB-SAPN） 蛋白的自组装蛋白纳米颗粒核心在大肠杆菌 BL21 （DE3） 中的表达

1. 根据制造商的说明，在 2 L 无菌玻璃锥形瓶中混合 95 mL 的组分 A 和 5 mL 的填料 B 组分（参见材料表）。添加氨苄青霉素至终浓度为 100 μg/mL。
2. 用来自先前建立的甘油原液培养物的大肠杆菌接种培养基。在 30 °C 下孵育培养物，以每分钟 200 转 （rpm） 振荡 48 小时
   注:使用过的大肠杆菌 BL21 （DE3） 原液含有带有 SHB-SAPN 基因的氨苄青霉素抗性表达载体。尽管培养基的一般方案建议在 37 °C 下孵育 24 小时，但在 30 °C 下孵育 48 小时可提供更高的 SHB-SAPN 产量。
3. 将培养物转移到两个 50 mL 锥形管中。用固定角转子在 4 °C 下以 4,000 x g 离心管 10 分钟。去除上清液并保存沉淀以收获细胞><。 注:细胞沉淀可以立即处理或在 -80 °C 下冷冻直至使用。

2. 超声处理裂解大肠杆菌 BL21（DE3）

Materials