使用亲和层析纯化自组装蛋白质纳米颗粒

摘要

来源：Karch, C. P. 等，用于需要三聚体表位呈递疫苗的E. coli表达自组装蛋白纳米颗粒的制备 J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了利用亲和液相色谱纯化组氨酸标签自组装蛋白纳米颗粒（SAPNs）的方法。所获得的纯化SAPN组分适用于疫苗开发，在潜在的免疫治疗应用中具有广阔前景。

方案

1. 含六螺旋束（SHB-SAPN）蛋白的自组装蛋白纳米颗粒核心的表达 E. coli BL21(DE3)

1. 根据制造商说明（参见材料表），在2 L无菌玻璃锥形瓶中混合95 mL培养基A组分和5 mL B组分。加入氨苄青霉素，使其终浓度为100 μg/mL。
2. 用先前建立的甘油菌种接种E. coli。在30 °C、200转/分钟（rpm）振荡条件下培养48小时。
   注意：所用的E. coli BL21 (DE3) 菌种含有氨苄青霉素抗性表达载体，携带SHB-SAPN基因。尽管培养基的一般操作建议在37 °C培养24小时，但在30 °C培养48小时可获得更高的SHB-SAPN表达量。
3. 将菌液转移至两个50 mL圆锥管中。在4 °C条件下，使用固定角转子以4,000 × g离心10分钟。弃去上清液，保留沉淀以收获细胞。
   注意：细胞沉淀可立即进行后续处理，也可在-80 °C冷冻保存待用。

2. 裂解 E. coli BL21(DE3) 超声破碎法

注意

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
2-丙醇	Fisher	BP26181	4 L
氨苄青霉素	Fisher	BP1760-25	25 g
Corning 一次性真空过滤/储存系统	Fisher	09-761-108	多种规格
GE Healthcare 5 mL HisTrap HP 预装柱	GE HealthCare	45-000-325	5 支装
甘油	Fisher	BP229-4	4 L
咪唑	Fisher	O3196-500	500 g
Magic Media E. coli 表达培养基	ThermoFisher	K6803	1 L
MilliporeSigma Millex 无菌注射器 0.22 mm 滤器	Millipore	SLGV033RB	250 支装
One Shot BL21 Star (DE3) 化学感受态 E. coli	ThermoFisher	C601003	20 瓶
磷酸二氢钠	Fisher	BP329-500	500 g
Tris 碱	Fisher	BP152-1	1 kg
尿素	Fisher	BP169-500	2.5 kg
设备
Fiberlite F14-14 x 50cy 固定角转子	ThermoFisher	096-145075	转子
NGC Quest 10 层析系统	BioRad	7880001	用于蛋白质纯化的 FPLC 系统
Sonifer 450	Branson	also known as 096-145075	超声破碎仪