从骨髓干细胞制备质膜囊泡

摘要

来源：Xu, L. 等，骨髓间充质干细胞质膜囊泡的制备用于潜在的细胞质置换治疗 ，《视觉化实验杂志》（2017）

本视频展示了一种通过将骨髓干细胞快速穿过膜滤器来制备质膜囊泡的方法。这些质膜囊泡在细胞质置换治疗中具有潜在应用价值。

方案

1. 仪器装置的组装

1. 为确保无菌，使用组织培养罩前，先打开其紫外线（UV）灯照射30分钟。
2. 拧开一次性25 mm滤器单元，将单元的帽盖和底座浸入装有75%乙醇的200 mL玻璃杯中，浸泡30分钟。该单元由医用级聚丙烯制成。
3. 用镊子夹取单元的帽盖和底座，手动甩去残留乙醇，然后在超净台内静置晾干10分钟。
4. 将一张19 mm聚碳酸酯膜用磷酸盐缓冲液（PBS）润湿，并小心放置于滤器底座支撑基质的上方。该聚合物膜表面光滑平整，带有核孔径为3 µm的微孔。
5. 将帽盖与底座拧紧，重新组装滤器单元。确保膜未从中心位置移位。
6. 取下1 mL胰岛素注射器的针头，吸取1 mL PBS。将注射器连接至滤器单元，推动PBS通过滤器，以润湿组件并检测是否存在泄漏。

2. 质膜囊泡（PMVs）的制备

1. 按照Nemeth et al.报道的方法，将骨髓间充质干细胞（BMSC）接种于含15%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素的杜氏改良伊格尔培养基（DMEM）中，在37 °C、含5% CO₂ 的湿润培养箱中培养。
2. 传代细胞时，吸除培养基，并用0.5 mL无钙PBS清洗孔板。
3. 加入0.5 m....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
IsoporeTM 膜	Millipore	TSTP04700	3 mm 孔径
一次性滤器装置	Xinya，中国上海	25 mm	医用级聚丙烯
胰岛素注射器	BD	328446	1 ml