口服递送改造酵母细胞至小鼠肠道免疫系统

摘要

来源：Hudson, L. E. 等，益生酵母的转化及其经口服灌胃后从小鼠胃肠道免疫组织中的回收。J. Vis. Exp. (2016)

本视频展示了将转化的酵母细胞经口给予小鼠模型的操作过程。通过灌胃技术将转化的酵母细胞经口送入小鼠胃部。随后，这些细胞迁移至小肠，由微皱褶细胞吞噬，并被转运至派尔集合淋巴结，从而进入肠道免疫系统。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 利用紫外线诱变法构建营养缺陷型酵母菌株

1. 生成生存曲线以确定所需的紫外线（UV）照射剂量
   1. 制备YPD（酵母提取物蛋白胨葡萄糖）培养基及其他所列试剂 表1 按照标准操作程序，将单菌落接种至5-10 ml YPD培养基中。将培养物置于30℃摇床中孵育 °用 C O/N 饱和至少 8 小时。
   2. 使用分光光度计测定过夜（O/N）培养物的细胞浓度，方法为将细胞在塑料比色皿中以水按1:10比例稀释。将细胞稀释至浓度为10⁷ 细胞/ml，溶于20 ml无菌蒸馏水中。
   3. 将稀释后的细胞倒入无菌塑料培养皿中，移去皿盖，将培养皿置于紫外灯下方14 cm处。
   4. 将细胞暴露于连续的5,000 µJ 和 10,000 µJ剂量的紫外线照射，提取500 µ每次增量处理后收集细胞，以便在暴露于0后取样 µJ, 5,000 µJ，10,000 µJ，15,000 µJ, 20,000 µJ, 25,000 µJ, 30,000 µJ, 40,000 µJ 和 50,000 µ紫外线照射的 J ....

结果

图1. 在YPD培养基上生长的酵母菌落。 该YPD平板示例显示了益生酵母经紫外线照射后的可存活菌落形成单位（CFU）。细胞经过连续稀释，使得各个独立的CFU可被区分并计数。

图 2. 二倍体益生酵母的存活曲线。<.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
SmartSpec 3000 分光光度计	BioRad	170-2501	用于测定酵母培养物细胞浓度和 OD600 的分光光度计示例
New Brunswick 滚筒式摇床	Eppendorf	M1053-4004	用于酵母培养孵育的滚筒式摇床示例
UV Stratalinker 2400	Stratagene	400075-03	Stratalinker 示例
Stuart Colony Counter SC6PLUS	11983044	Fisher Scientific	带放大功能的平板计数器，通过笔触压力感应记录菌落数量
Scienceware 菌落计数笔	F378620002	Bel-Art Scienceware	手持式菌落计数笔
复制平板接种装置	Fisherbrand	09-718-1	复制平板接种架及垫片示例
丝绒方块	Fisherbrand	09-718-2
L 形无菌细胞涂布棒	Fisherbrand	14665230
鲑鱼精来源的单链脱氧核糖核酸	Sigma-Aldrich	D7656-1ML	酵母 LiOAc 转化中使用的载体 DNA 示例
灌胃针	Braintree Scientific	N-PK 002	适用于 15–20 g 小鼠的推荐针头为 22 号（1.25 mm 球头）、长 1 英寸的直型可重复使用灌胃针。对于体重超过 20 g 的小鼠，可使用 20 号或更大规格的直型或弯型灌胃针
1 mL 无菌滑动接头一次性结核菌素注射器	Becton Dickinson	BD 309659
钝头镊子，例如 Electron Microscopy Sciences 7"（178 mm）带锯齿尖端、宽握把镊子	Electron Microscopy Sciences	77937-28	解剖所需钝头镊子的示例
直型和弯型解剖剪刀	Electron Microscopy Sciences	72966-02 和 72966-03	解剖所需剪刀的示例