一种用于在Mycobacterium bovis BCG上呈递目标抗原的亲和素-生物素偶联技术

摘要

来源：Liao, T. A.，等，利用亲和素-生物素系统通过非遗传性表面修饰在卡介苗（Mycobacterium bovis BCG）疫苗中表达外源抗原。J. Vis. Exp. (2018)。

该视频展示了一种在牛分枝杆菌卡介苗（Mycobacterium bovis BCG）上加载抗原以增强其免疫原性的技术。该方法利用亲和素-生物素系统将外源性抗原包被于细菌表面。

方案

1. BCG 细胞表面生物素标记

1. 在含有10% OADC（油酸、白蛋白和葡萄糖溶液）和0.05% Tween 80的Middlebrook 7H9液体培养基中，于37 °C、50 rpm振荡培养箱中培养BCG，直至OD值达到0.5–1。
   注意：BCG属于生物安全二级病原体，所有涉及BCG的实验操作均应在生物安全柜内进行，并佩戴适当的个人防护装备。
2. 用500 µL冰浴预冷的无内毒素PBS（pH 8.0）加0.1% Tween80（PBST）洗涤10⁹个BCG细胞3次。将BCG菌体沉淀重悬于无菌、无内毒素的PBS中。
3. 使用前立即配制1 mL 10 mM Sulfo-NHS SS生物素溶液，溶于无菌过滤的水中。​
   1. 将细菌与1 mL 0.5 mM Sulfo-NHS SS生物素在室温下孵育30分钟。
4. 用500 µL冰浴预冷的PBST洗涤标记后的细菌3次，以去除未反应的生物素化试剂。
   1. 将菌体沉淀重悬于1 mL PBST中。

2. 单体亲和素融合蛋白与生物素化BCG表面的结合

1. 在摇床平台上，将 5 × 10⁸ 个生物素标记的 BCG 与 Avi-蛋白（终浓度为 10 μg/mL 的 PBS-T 溶液）于室温下混合孵育 1 小时。
2. 用 500 µL 冰冷的 PBST 溶液洗涤细菌 3 次。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
无内毒素 RPMI 1640	StemCell Technologies	36750
Sulfo-NHS SS 生物素	Thermo Fisher	21328
Middlebrook 7H9 肉汤	BD Diagnostic Systems	271310
OADC	BD Diagnostic Systems	B11886
吐温 80	Sigma-Aldrich	P1379