一种用于筛选强效抑制寨卡病毒生长的干扰素的体外检测方法

摘要

来源：Contreras, D. 等., 寨卡病毒感染性细胞培养系统及 体外 干扰素的预防作用 视频实验杂志 (2016)

该视频演示了一种 体外 用于筛选具有抗寨卡病毒活性的干扰素的检测方法。寨卡病毒作为一种人类病原体，在宿主细胞内入侵后进行复制，感染邻近细胞，形成明显的区域或病毒蚀斑。Ⅰ型干扰素作为抗病毒因子，可抑制病毒复制，从而阻止宿主细胞单层中病毒蚀斑的形成。

方案

1. 针对寨卡病毒感染的细胞因子文库筛选

1. 将 naive Vero 细胞以 1 x 10⁵ 每孔细胞数使用12孔板。细胞贴壁后（接种后6小时），向每孔加入各细胞因子
   以生物学重复（每孔2 ml体积）加入指定浓度。设置仅含载体（PBS）的对照组。
2. 处理后12小时，进行寨卡病毒接种（每孔400 μl，MOI为0.1）。设置未接种病毒的阴性对照孔（模拟感染对照）。
3. 感染后4小时，弃去病毒接种液，更换为细胞因子处理的培养基（2 ml）。将细胞在37 °C继续孵育44小时。
4. 感染后48小时，使用相差显微镜计数病毒蚀斑，并在40倍放大倍数下采集感染细胞的代表性图像（图1).

结果

图1： 干扰素表现出强烈的抗寨卡病毒活性。（A）显示不同细胞因子对寨卡病毒生长的调节作用，与溶剂对照组相比。柱状图中显示了平均值和标准差。干扰素对寨卡病毒复制表现出统计学上显著的抑制作用（p 值 <0.05）。（B 和 C）经或未经细胞因子处理的寨卡病毒感染细胞的相差显微图像。感染细胞形成的病毒蚀斑可见为病灶。注意经干扰素处理的孔中无病毒蚀斑。未感染寨卡病毒的模拟对照作为阴性对照。（比例尺 = 50 µm）。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
非洲绿猴肾细胞系	美国典型培养物保藏中心	CCL-81
寨卡病毒株 PRVABC59	美国疾病控制与预防中心（CDC）
IL-6	Peprotech	200-06
IL-1 alpha	Peprotech	200-01A
TNF-alpha	Peprotech	300-01A
干扰素 alpha A	R & D Systems	11100-1
干扰素 beta	Peprotech	300-02BC
干扰素 gamma	Peprotech	300-02
Centrifuge 5415R	Eppendorf	5415R
Centrifuge 5810R	Eppendorf	5810R
配备 Nikon Intenselight C-HGFI 的尼康 Eclipse Ti 免疫荧光显微镜	Nikon