用于成像质谱流式的组织免疫染色

摘要

来源：
Jake Griner¹, Arwen Wedgeworth², Brenton Puckett², Kacey Idouchi¹, Slivia Guglietta², Carsten Krieg<sup>1

1</sup>美国南卡罗来纳医科大学病理学与实验医学系。

²美国南卡罗来纳医科大学再生医学与细胞生物学系。

该视频介绍了用于成像质谱流式细胞术的组织样本制备过程。首先对组织进行处理，以暴露抗原表位、通透细胞膜，并封闭非特异性抗体结合位点。随后，将组织与金属标记的抗体混合物及核染料共同孵育。最后，使用光学扫描仪对处理后的组织样本进行成像。

方案

1. 组织预处理：

对于新鲜冷冻组织：

1. 使用前至少一小时，将玻璃染色缸放入 -20°C 冰箱中预冷。
2. 从 -80°C 冰箱中取出载玻片，放入置于 -20°C 冰箱中的玻璃染色缸内，静置至少 15 分钟。
3. 在通风橱内，使用安瓿瓶切割器打开 16% 多聚甲醛（PFA）玻璃安瓿瓶，并妥善丢弃破碎的玻璃。
4. 向塑料染色缸中加入 10 mL 的 16% PFA 和 30 mL 磷酸盐缓冲液（PBS），确保 PBS 已预先冷却至 4°C。
5. 将该溶液转移至 4°C 冰箱中，静置至少 15 分钟。
6. 15 分钟后，将装有载玻片的玻璃染色缸转移至 4°C 冰箱中，继续放置 10 分钟。
7. 将载玻片从玻璃染色缸转移至含有冷的 4% PFA 溶液的塑料染色缸中。
8. 在冰箱中用 4% PFA 固定载玻片 30 分钟。
9. 用室温 PBS 漂洗载玻片三次，每次 5 分钟，确保每次漂洗之间充分冲洗。

对于福尔马林固定石蜡包埋组织：

1. 从贴附在带正电荷的标准显微镜载玻片上的5 µm福尔马林固定石蜡包埋（FFPE）组织切片开始。
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结果

图 1: 用于质谱流式细胞术成像的组织免疫染色程序的示意图

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材料

<表格border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"> 本文使用的材料清单 姓名 公司 目录编号 评论 设备 Coplin 罐 带通风孔的塑料 5 滑邮件封套 抗原修复装置（Decloaking chamber） 扫描器 化学品和酶: 二甲苯 200 标准乙醇 HPLC 水 Abcam ab93684 Tris-EDTA pH9 HIER 缓冲液 TBS 含 0.1% Trition X-100 的 TBS 含 10% BSA 的 TBS PBS 系列 含 0.2% Trition X-100 的 PBS