使用全细胞膜片钳技术对内侧前庭核神经元施加噪声电流

摘要

来源：Stefani, S. P.，等。随机噪声刺激在体外评估内侧前庭核神经元敏感性中的应用。J. Vis. Exp. (2019)。

本视频演示了一种实验方案，该方案采用全细胞膜片钳技术，向内侧前庭神经核神经元施加阈下噪声电流，以研究噪声电流对神经元电刺激敏感性的影响。

方案

所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。

1. 动物

注意：小鼠购自澳大利亚啮齿类动物中心（ARC；澳大利亚珀斯），并饲养于悉尼大学医学基金会大楼动物实验中心。

1. 将小鼠饲养在标准的12小时光照/12小时黑暗循环环境中，并提供环境丰富化措施。
2. 所有实验均使用雄性和雌性C57BL/6小鼠（3–5周龄）。

2. 溶液的配制

1. 配制1 L人工脑脊液（ACSF），其中包含29 mM NaHCO₃、11 mM葡萄糖、120 mM NaCl、3.3 mM KCl、1.4 mM NaH₂PO₄、2.2 mM MgCl₂、2.77 mM CaCl₂。
2. 配制200 mL蔗糖-人工脑脊液（sACSF），其中包含29 mM NaHCO₃、11 mM葡萄糖、241.5 mM蔗糖、3.3 mM KCl、1.4 mM NaH₂PO₄、2.2 mM MgCl₂、2.77 mM CaCl

结果

图 1：12 pA 阈值的客观确定。 将小于 12 pA（3 和 6 pA）以及大于 12 pA（18 和 24 pA）的放电率数据合并并取平均值。随后使用单因素方差分析（ANOVA）对假手术组与>12 pA 组之间，以及<12 pA 组与>12 pA 组之间的差异进行统计学显著性分析。*p < 0.05。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
CaCl2	Scharlau	CA01951000	用于ACSF和sACSF
D-(+)-葡萄糖	Sigma	G8270	用于ACSF和sACSF
EGTA	Sigma	E0396-25G	用于含钾细胞内溶液
HEPES	Sigma	H3375-25G	用于含钾细胞内溶液
KCl	Chem-supply	PA054-500G	用于ACSF、sACSF和细胞内溶液
K-葡萄糖酸盐	Sigma	P1847-100G	用于含钾细胞内溶液
Mg-ATP	Sigma	A9187-500MG	用于含钾细胞内溶液
MgCl₂	Chem-supply	MA00360500	用于ACSF和sACSF
Na3-GTP	Sigma	G8877-100MG	用于含钾细胞内溶液
NaCl	Chem-supply	SO02270500	用于ACSF和细胞内溶液
NaH2PO4.2H2O	Ajax	AJA471-500G	用于ACSF和sACSF
NaHCO₃3	Sigma	S5761-1KG	用于ACSF和sACSF
蔗糖	Chem-supply	SA030-500G	用于sACSF
异氟烷	Henry Schein	1169567762	用于小鼠麻醉
仪器设备
硼硅酸盐玻璃毛细管	Warner Instruments	GC150T-7.5	1.5 mm 外径，1.16 mm 内径，7.5 cm 长度
数据采集软件	Axograph		用于电生理学及分析
弗里德曼-皮尔逊咬骨钳	世界精密仪器	14089	用于解剖
微移液管拉制仪	Narishige	PP-830	用于微量移液器
多钳放大器	Axon Instruments	700B	用于电生理学实验
pH计	Sper 科学	860033	用于内液
标准型剪刀	FST	14028-10	用于解剖
Sutter 微操作器	Sutter	MP-225/M	用于电生理学实验
直立显微镜	Olympus	BX51WI	用于电生理学
振动切片机	Leica	VT1200	用于脑组织切片