在小鼠脑切片中通过GABA喷射记录全细胞电流

摘要

来源：Feng, Y. 等，脑片中通过喷射 GABA 诱导的全细胞电流，J. Vis. Exp. (2017)

本视频展示了在小鼠前额叶皮层脑片中记录由γ-氨基丁酸（GABA）诱导的全细胞电流的过程。通过精确递送GABA，可激活突触后神经元中的氯离子通道，从而产生抑制性突触后电流（IPSCs）。随着GABA浓度升高，这些IPSCs幅度增大，反映了GABA在突触传递中的抑制性作用。

方案

所有涉及动物样本的操作均经过适当的动物伦理审查委员会审核并批准。

1. 溶液的配制

1. 根据已发表的研究中列出的成分（见表1），配制500 mL标准人工脑脊液（ACSF）。
   1. 使用洁净的玻璃烧杯和去离子水新鲜配制ACSF溶液。用去离子水清洗药匙并干燥后，向500 mL去离子水中依次加入氯化钠（NaCl）、氯化钾（KCl）、磷酸二氢钠（NaH₂PO₄）、碳酸氢钠（NaHCO₃）、硫酸镁（MgSO₄）、D-葡萄糖，并在用95% O₂/5% CO₂混合气体预充气约20分钟后（如表1所述），再加入氯化钙（CaCl₂）。持续搅拌直至完全溶解。
   2. 确保ACSF溶液完全澄清，无任何沉淀。调节pH至7.2–7.4，并用95% O₂和5% CO₂的混合气体持续充气约20分钟。
2. 根据表2中所述化学成分，配制250 mL切片用溶液。
   1. 向250 mL去离子水中加入KCl、氯化镁（MgCl₂）、NaH₂PO₄、....

结果

图1. 喷流微管与记录电极示意图。
(A) 喷流微管与记录微管之间的距离。 (B) 喷流微管（左）和记录电极（右）位于脑切片表面的位置。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
玻璃硼硅酸盐微量移液管	Shutter Instruments	BF150-86-10	外径 1.50 mm；内径 0.86 mm
微量移液管拉制仪	Shutter Instruments	MODEL P-97	Flaming/Brown 微量移液管拉制仪
显微操作器	Shutter Instruments	MP-285
计算机控制放大器	Molecular Devices	Multiclamp 700B
数字采集系统	Molecular Devices	Digidata 1440A
成像相机	Nikon	2115001	检测设备
显微镜	Nikon	Eclipse FN1
Master 8	A.M.P.I.	Master-8 脉冲刺激器
振动切片机	Leica	VT 1000S
Picospritzer	Parker Hannifin		用于细胞研究中皮升级液体喷射的压力系统
剃须刀片	Gillette	74-S	FLYING EAGLE
视频监视器	Panasonic	WV-BM 1410
502 胶水	Deli	7146	氰基丙烯酸酯胶
蠕动泵	上海佳朋科技有限公司	BT100-1F
视频摄像机	Olympus America Medical	OLY-150
移液管	Biologix	30-0138A1