基于微电极阵列的小鼠脊髓切片神经元网络评估

Abstract

来源:Iredale， JA， et al. 使用微电极阵列记录脊髓伤害感受回路中的网络活动。J. Vis. Exp. （2022 年）。

该视频演示了一种基于微电极阵列的检测方法，用于研究小鼠脊髓切片中的神经元网络活动。首先，记录切片浅表背角 （SDH） 的电生理活性。然后，引入钾通道抑制剂以延长去极化，导致整个神经元网络的同步节律活动。

Protocol

所有涉及样本采集的程序均已按照研究所的 IRB 指南执行。

1. 体外电生理学

1. 制备用于脊髓切片制备和记录的溶液
   1. 人工脑脊液
      注意:人工脑脊液 （aCSF） 用于界面培养室，切片储存在记录开始之前，在实验期间用作药物的灌注液和稀释剂。详细组成见表 1。
2. 通过将所需数量的上述物质（不包括 CaCl₂）添加到 2 L 蒸馏水中，制备含有（以 mM 为单位）118 NaCl、25 NaHCO₃、10 葡萄糖、2.5 KCl、1 NaH₂、PO₄、1 MgCl₂ 和 2.5 CaCl₂ 的 aCSF。
将
3. 上述溶液与碳化物（95% O₂、5% CO₂ ）鼓泡 5 分钟，然后加入 CaCl₂.
   注意:此步骤可防止 CaCl₂ 沉淀，即溶液不应变得浑浊。对于实验期间的药物应用，将 aCSF 中的药物储备溶液稀释至所需的最终浓度。

Results

图 1:脊髓切片的方向、安装和切割方法。 （A） 横向切片需要一个聚苯乙烯泡沫塑料切割块，上面有一个支撑槽。脊髓靠在支撑槽中的阻滞上，脊髓的背侧背对阻滞。用氰基丙烯酸酯胶粘剂将块和绳子粘在切割台上。（B） 通过在切割阶段放置一条细线氰基丙烯酸酯胶粘剂，然后将脊髓侧卧在胶水上来制备矢状切片。（C） 通过在切割阶段放置一条细线氰基丙烯酸酯胶粘剂，然后将脊髓腹侧朝下放在胶水上来制备水平切片。

图 2:微电极阵列上的组织定位。

Materials