方法文章

小鼠海马-内嗅皮层脑片局部场电位记录

2025年7月8日

本文内容

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

来源：Whitebirch, A. C. 利用急性小鼠脑切片研究海马区自发性神经网络活动。J. Vis. Exp. (2020)

该视频演示了在小鼠海马-内嗅皮层脑片中记录局部场电位（LFP）的操作步骤。在海马CA3区辐射层施加电刺激，可引起CA1区锥体细胞层突触后电位的变化。CA1神经元膜电位的总体变化被称为局部场电位，本实验即对此进行记录。

方案

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

所有涉及样本采集的操作均按照本机构的IRB指南进行。

1. 经心灌注

  1. 将一个容量为 60 mL 的注射器作为蔗糖切片液的储液罐，悬挂在实验台面上方约 18 英寸处（例如，使用垂直支架上的三叉旋转夹）。将管路连接至储液罐底部，穿过滚轴夹，再将管路另一端连接至一根洁净的 20 G 针头。
  2. 向 60 mL 储液罐中加入约 30 mL 冰冷的蔗糖溶液，并将碳氧混合气（carbogen）导管插入蔗糖储液罐中，持续向灌注液中通气。
    注意： 确保蔗糖溶液在管路和针头中流动顺畅，无气泡滞留。流速应调节至刚好使针头持续稳定地滴出蔗糖液滴。
  3. 使用搅拌器将冷冻的蔗糖打碎并搅拌成冰浆状，然后用大刮勺或大勺将冰浆均匀铺开。
    1. 在玻璃培养皿盖的边缘周围放置少量蔗糖冰浆，并在培养皿底部也加入少量蔗糖冰浆。
    2. 向灌注液储液罐中加入约 20–30 mL 蔗糖冰浆，与其中 30 mL 冰冷液态蔗糖充分混合，使储液罐内形成以极冷液态蔗糖为主、含有部分残余冷冻成分的混合液。
  4. 将小鼠放入连接异氟烷蒸发器的麻醉舱中。以约 2 L/min 的氧气流速，将蒸发器旋钮调至 5% 异氟烷浓度，并启动计时器。
    注意： 从此时起保持计时器持续运行，用于....

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

结果

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

水平海马-内嗅皮层切片示意图及DAPI染色；恢复室装置。
图1：水平倾斜海马-内嗅皮层（HEC）切片的制备。（A）（i）取出脑组织后，使用刀片进行两次冠状面切割，以去除脑的后部和前部组织。（ii）琼脂斜坡由两个粘合在切片机平台上的倾斜部分构成。为制备中间部位海马的切片，将脑组织块置于琼脂斜坡上，使其前表面朝上并紧贴斜坡较高侧的支撑部分；为制备更腹侧的海马切片，则将脑组织块置于琼脂斜坡上，使其前表面朝下，使后部切割面与斜坡较高侧的支撑部分接触。（iii）每当切下一片组织时，使用手术刀再进行数次切割，以分离两侧半球并去除不必要的组织。（B）DAPI.......

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
急性脑切片孵育支架NIH 3D 打印交流平台3DPX-001623由 ChiaMing Lee 设计，网址 https://3dprint.nih.gov/discover/3dpx-001623
腺苷-5′-三磷酸镁盐Sigma AldrichA9187-500MG
Ag-Cl 接地颗粒Warner64-1309, (E205)
琼脂Becton, Dickinson214530-500g
抗坏血酸Alfa Aesar36237
烧杯（250 mL）Kimax14000-250
烧杯（400 mL）Kimax14000-400
生物素标记物（biocytin）Sigma AldrichB4261
搅拌器OsterBRLY07-B00-NP0
小型邦剪刀（Bonn scissors）Becton, Dickinson14184-09
带细丝的硼硅酸盐玻璃毛细管（外径 1.5 mm，内径 0.86 mm，长度 10 cm）Sutter InstrumentsBF150-86-10HP建议使用火焰抛光的毛细管。
氯化钙溶液（1 M）G-BiosciencesR040
相机OlympusOLY-150
压缩碳合气体（95% 氧气 / 5% 二氧化碳）AirgasX02OX95C2003102
压缩氧气AirgasOX 200
恒压隔离刺激器Digitimer Ltd.DS2A-Mk.II
盖玻片（22x50 mm）VWR16004-314
氰基丙烯酸酯粘合剂Krazy GlueKG925建议使用刷涂型以提高精确度
数据采集软件AxographN/A任何等效软件（例如 pClamp）均可使用。
Dell Precision T1500 塔式工作站台式机DellN/A目录号将取决于具体计算机型号——只要能运行电生理数据采集软件，任何计算机均可使用。
Digidata 1440AMolecular Devices1-2950-0367
数字计时器VWR62344-6414通道 Traceable 计时器
一次性吸水垫VWR56616-018
解剖剪刀Fine Science Tools14082-09
双刃剃须刀片PersonnaBP9020
双通道自动温度控制器Warner Instrument CorporationTC-344B
双表面或层流优化记录室N/AN/A本方案中使用的记录室为定制装置。商用等效产品为 Warner Instruments 的 RC-27L。
设备机架Automate ScientificFR-EQ70"机架并非绝对必要，但有助于电生理设备的整理
乙二醇双（2-氨基乙基醚）四乙酸（EGTA）Sigma Aldrich324626-25GM
滤纸Whatman1004 070
精密天平Mettler ToledoXS204DR
Flaming/Brown 微量移液器拉制仪Sutter InstrumentsP-97
玻璃培养皿（100 x 15 mm）Corning3160-101
葡萄糖Fisher ScientificD16-1
鸟苷-5′-三磷酸钠盐水合物Sigma AldrichG8877-250MG
冰桶Sigma AldrichBAM168072002-1EA
异氟烷蒸发器General Anesthetic ServicesTec 3
实验室胶带Fisher Scientific15-901-10R
镜头纸Fisher Scientific11-996
光源OlympusTH4-100
氯化镁溶液（1 M）Quality Biological351-033-721EA
磁力搅拌子Fisher Scientific14-513-56目录号取决于搅拌子的尺寸。
显微操作器Luigs & NeumannSM-5
显微操作器（手动）ScientificaLBM-2000-00
显微镜OlympusBX51WI
微型刮勺Fine Science Tools10089-11
显示器Dell2007FPb
MultiClamp 700B 微电极放大器Molecular DevicesMULTICLAMP 700BMultiClamp 700B 应包含前置放大器、移液器夹持器和模型细胞。
N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-(2-乙磺酸)（HEPES）Sigma AldrichH3375-25G
针头（20 号，长度 1.5 英寸）Becton, Dickinson305176
尼龙丝线YLI Wonder Invisible Thread212-15-004规格 0.004。此货号来自 Amazon.com
尼龙网Warner Instruments Corporation64-0198
蠕动泵Harvard Apparatus70-2027
磷酸肌酸二(三羟甲基氨基甲烷)盐Sigma AldrichP1937-1G
移液器夹持器Molecular Devices1-HL-U
铂丝World PrecisionPT0203
聚乳酸（PLA）丝材UltimakerRAL 9010
氯化钾Sigma AldrichP3911-500G
葡萄糖酸钾Sigma Aldrich1550001-200MG
氢氧化钾Sigma Aldrich60377-1KG
剃须刀片VWR55411-050
滚压夹World Precision Instruments14041
天平Mettler ToledoPM2000
手术刀柄Fine Science Tools10004-13
切片固定架（slice harp）WarnerSHD-26GH/2
碳酸氢钠Fisher ChemicalS233-500
氯化钠Sigma AldrichS9888-1KG
无水磷酸二氢钠Fisher ChemicalS369-500
丙酮酸钠Fisher ChemicalBP356-100
刮勺VWR82027-520
大刮勺/药勺VWR470149-442
无菌手术刀片Feather72044-10
搅拌器/加热板Corning6795-220
单向旋塞阀World Precision Instruments14054
三通旋塞阀World Precision Instruments14036
蔗糖Acros OrganicsAC177142500
旋转夹具支撑架Fisher Scientific14-679Q
手术剪刀，尖/钝头Fine Science Tools14001-12
注射器（1 mL）Becton, Dickinson309659
注射器（60 mL，带鲁尔锁头）Becton, Dickinson309653
三爪夹Fisher Scientific05-769-8Q
大组织镊Fine Science Tools11021-15
小组织镊Fine Science Tools11023-10
移液管Fisher Scientific13-711-7M
管路TygonE-3603内径 1/16 英寸，外径 3/16 英寸
管路TygonR-3603内径 1/8 英寸，外径 1/4 英寸
真空润滑脂Dow Corning14-635-5D
振动刀片式切片机LeicaVT 1200S
带法拉第笼的防震台Micro-G / TMC-ametek2536-516-4-30PE
容量瓶（1 L）KimaxKIM-28014-1000
容量瓶（2 L）PYREX65640-2000
温水浴VWR1209

重印与许可

申请许可以重复使用本 JoVE 文章的文本或图表

申请许可

标签

CA3 CA1 ACSF

相关文章