长时间孵育后小鼠脑切片中神经活动的测量

本文内容

摘要

本视频展示了一种利用钙成像和电生理记录技术测量小鼠脑切片中神经元活动的方法。通过用钾离子灌注组织，并借助高速数字成像记录细胞内钙离子变化，该方法可揭示神经元的实时反应。

方案

所有涉及动物样本的操作均已经过适当的动物伦理审查委员会审核并批准。

1. 钙染料负载

根据研究人员的个人偏好选择钙离子染料。此处我们使用 Fluo-8AM 或 Fluo-4AM。但该方法也可适用于其他染料：将钙离子染料溶解于 DMSO 中，配制成 1 mM 的溶液，并加入 1% 的嵌段共聚物（例如，普朗尼克酸-127），最终体积为 50 µL，超声处理 10 分钟。
将上述溶液加入 aCSF 中，使染料终浓度为 10 µM，嵌段共聚物为 0.01%，用于脑片染色。
1. 对于成年动物（>12 周龄），直接将染料溶液（50 µL）滴加至脑片上，并维持 75 分钟，以促进染料更好地渗透至深层组织。
2. 为确保脑片在染色孵育期间充分供氧，准备一个带密封盖的玻璃加载室（直径 2.5 cm，高 3.5 cm 的圆形罐），其中将钙离子染料稀释于 2.5 mL aCSF 中。持续通入 95% O₂/5% CO₂ 混合气体，但不要鼓泡。
染料加载完成后，用 aCSF 洗涤组织，然后将其转移至孵育系统中，缓慢降温至 15 - 16 °C，直至准备用于实验。

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材料

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