长时间孵育后测量小鼠脑切片中的神经活动

摘要

来源:Cameron， MA 等人，用于电生理学和钙成像的急性神经元组织的长时间孵育。J. Vis. Exp. （120）、（2017 年）

该视频演示了一种使用钙成像和电生理记录测量小鼠脑切片中神经元活动的技术。通过用钾离子灌注组织并通过高速数字成像记录细胞内钙变化，该方法揭示了实时神经元反应。

方案

所有涉及动物样本的程序均已由适当的动物伦理审查委员会审查和批准。

1. 钙染料负载

1. 根据研究人员个人的偏好选择钙染料。这里我们使用 Fluo-8AM 或 Fluo-4AM。然而，这种方法也可以应用于其他染料:将钙染料溶解在 DMSO 中，溶于 1 mM 溶液和 1% 嵌段共聚物（例如，pluronic acid-127）至最终体积为 50 μL，并超声处理 10 分钟。
2. 向 aCSF 中加入溶液，最终浓度为 10 μM，用于脑切片的 0.01% 嵌段共聚物。
   1. 对于成年动物（>12 周），将染料 （50 μL） 直接移液到脑切片上，并保持 75 分钟，以使染料更好地渗透到深层。
   2. 为确保在染料孵育过程中浸没切片充分充氧，请准备一个带有密闭盖子的玻璃加载室（直径 2.5 厘米、3.5 厘米高的圆形罐），其中装有在 2.5 mL aCSF 中稀释的钙染料。用 95% O₂/5% CO₂ 连续充氧。不要冒泡。
3. 染料上样后，用 aCSF 洗涤组织并将其转移到孵育系统中，缓慢将温度降至 15 - 16 °C，直到准备好用于实验。

2. 电生理记录....

材料