离体大鼠结肠中结肠传入神经的电生理记录

摘要

来源：Meng, Y. 等，大鼠结肠传入纤维电生理特性体外表征。J. Vis. Exp. (2017)

本视频展示了一种在离体大鼠结肠上记录结肠传入神经活动的方法。结肠两端被插管并灌注生理盐水以增加腔内压力。随着压力升高，神经信号增强，表明神经受到刺激。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 灌流液和测试化合物的制备

1. 配制5 L克雷布斯溶液：113 mM氯化钠（NaCl）、5.9 mM氯化钾（KCl）、1.2 mM磷酸二氢钠（NaH₂PO₄）、1.2 mM硫酸镁（MgSO₄）、25 mM碳酸氢钠（NaHCO₃）、1.2 mM氯化钙（CaCl₂）和11.5 mM葡萄糖。用95% O₂ + 5% CO₂混合气体饱和该溶液。将约500 mL充氧后的克雷布斯溶液预先在冰箱中冷却。
2. 根据需要配制储备测试化合物分装液（1 mM辣椒素溶于乙醇，10 mM 5-羟色胺（5-HT）溶于生理盐水）。在使用前，将储备液用克雷布斯溶液稀释至终浓度（用于浴槽给药），或用生理盐水稀释（用于管腔内给药）。

2. 记录电极的制备

1. 使用常规电极拉制仪从无内丝的标准玻璃管（外径 1.5 mm）中拉制记录电极。调整拉制仪的加热和拉伸参数，使拉制后电极的电极杆长度在 20 至 25 mm 之间。

结果

图1. 大鼠结肠传入神经的电生理记录 体外. A. 一个示意图展示了 离体 “管状”结肠制备法的大鼠实验。将带有附着盆神经节（PG）的结直肠置于记录 chamber 中进行表面灌流，并在两端插管。通过注射泵实现腔内灌注，灌注方向为口侧至肛侧。通过关闭三通阀实现结肠扩张d在出口导管上。使用吸电极记录来自颈下神经节（PG）的一条细小神经分支。图中还显示了腰交感神经（LSN）的一个分支以及三条连接到颈下神经节（PG）的肺神经（PN）分支。 a投.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
戊巴比妥钠	上海西唐生物科技有限公司	B558
辣椒素	Sigma	M2028
电极拉制仪	MicroData Instrument Inc	PMP107
神经记录系统（生物放大器）	Digitimer, Ltd	Neurolog System
模数转换器	Cambridge Electronic Design	Micro1401
数据处理软件	Cambridge Electronic Design	Spike2 version 6
银丝	World Precision Instruments	EP12
玻璃管	World Precision Instruments	1B150-4
电极夹持器	World Precision Instruments	MEH3SBW
加热浴槽	Grant	GR150
解剖显微镜	Leica	Zoom2000
解剖显微镜	World Precision Instruments	PZMIII-BS
打火机	任意	NA
手术器械	World Precision Instruments	NA
昆虫针	自制，使用直径0.1 mm的不锈钢丝	NA
三维操纵器	World Precision Instruments	KITF-R
大鼠	任意	NA	可使用任意品系/性别。