离体小鼠空肠节段肠系膜传入神经活动记录

摘要

来源：Nullens, S.，等。小鼠空肠和结肠节段肠系膜传入神经活动的体外记录。视觉化实验杂志（2016年）。

本视频展示了在离体小鼠空肠段上记录肠系膜传入神经电活动的过程，以研究组织压力和运动变化对传入神经活动的影响。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 空肠传入神经的制备

1. 对实验前已获得当地伦理委员会批准的青春期或成年啮齿类动物实施安乐死例如，终末镇静后进行心脏穿刺、颈椎脱臼， 等等。).
   注意： 采用颈椎脱位法处死动物，从而在后续组织处理过程中无需额外麻醉或术后护理 体外.
   注意： 年龄已被证明会减弱肠系膜传入机械感受功能，因此我们建议研究人员在单次实验过程中严格采用特定的年龄组。
2. 将处死的实验动物置于仰卧位，使用手术刀沿腹壁正中线切开皮肤和腹肌层，切口从剑突延伸至耻骨联合。
3. 用冰冷的Krebs溶液灌洗腹腔，以防止腹腔内组织干燥（Krebs溶液成分：120.03 mM NaCl，6.22 mM KCl，1.57 mM NaHCO₃）₂PO₄，15.43 mM NaHCO₃₃，1.21 mM MgSO₄₄，11.52 mM D-葡萄糖和1.52 mM CaCl₂₂).
4. 使用锐利的剪刀迅速切除整个空肠，从十二指肠空肠曲远端起始处开始，切除约20 cm的小肠段，注意....

结果

图1：定制记录室与吸电极的示意图概览。 吸电极与记录室就位后的技术装置详细示意图。

图2：空肠传入神经活动体外记录的代表性轨迹图。 空肠多单位传入神经活动（imp.sec⁻¹）（上图）在基础状态及对两次升.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
氯化钠 (NaCl)	VWR Chemicals	2,78,10,295	复合克雷布斯溶液
氯化钾 (KCl)	Acros organics	196770010	复合克雷布斯溶液
磷酸二氢钠 (NaH2PO4)	VWR Chemicals	1,06,34,61,000	复合克雷布斯溶液
碳酸氢钠 (NaHCO3)	Merck	1,06,32,91,000	复合克雷布斯溶液
硫酸镁 (MgSO4)	Merck	1,05,88,61,000	复合克雷布斯溶液
氯化钙 (CaCl2)	Merck	2,38,11,000	复合克雷布斯溶液
D-葡萄糖	VWR Chemicals	1011175P	复合克雷布斯溶液
蒸馏水			复合克雷布斯溶液
PVC 管	Scientific Laboratory Supplies		肠段应固定在 PVC 管上
硅胶管	Scientific Laboratory Supplies		其余管路建议使用硅胶材质，便于清除管内碎屑
丝线	Pearsall Limited	10B15S220	将肠段固定于 PVC 管上
注射泵	Harvard Apparatus	55-2222	克雷布斯液的管腔内灌注
双目显微镜（目镜含 10 倍放大）	Zeiss STEMI 2000		传入神经解剖过程中的最佳可视化
恒温毯控制单元	Harvard Apparatus	507214	器官浴槽的加热
定制器官浴槽，底部覆盖 Sylgard 材料
Spike2 软件			数据的记录与分析
昆虫针，500 支，不锈钢，直径 0.2 mm	Austerlitz insect pins minutiens		传入神经的解剖
杜蒙特 #5 镊子，不锈钢，11 cm	World Precision Instrument	500341	传入神经的解剖
弹簧剪，14 cm	World Precision Instrument	15905	传入神经的解剖
DB digitimer	NL 108T2/10		压力传感器
显微操作器	Narishige	M-3333	吸电极的三维操控
显微操作器	X-4 旋转支架		吸电极的三维操控
显微操作器	GJ-8 磁性支架		吸电极的三维操控
光源	Euromex Microscopes Holland EK-1		传入神经解剖过程中的最佳可视化
CED 1401 记录装置			传入神经活动的记录
Humbug 50/60 Hz 噪声消除器	Quest Scientific Instruments		背景噪声的消除
输液泵	Gibson Minipuls 2		对固定肠段的器官浴槽进行灌注
微电极夹持半电池，1.5 mm	World Precision Instrument	MEH2SW	用于分离传入神经纤维的吸电极
硼硅酸盐玻璃毛细管，300 支；外径/内径 1.5/0.84	World Precision Instrument	1B150-4	用于分离传入神经的毛细管