在手术去神经支配的小鼠模型中测试感觉神经功能

Abstract

来源:Peterson， SC et al.， 皮肤外科去神经支配:一种在皮肤病小鼠模型中测试神经需求的方法。J. Vis. Exp. （2016 年）

该视频演示了通过手术去神经一侧并留下另一侧作为对照来测试小鼠模型中的感觉神经功能。对机械刺激的反应证实了感觉神经的作用。

Protocol

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 手术去神经支配

以
1. 每 20 g 小鼠体重 200 μl 的剂量腹膜内注射麻醉溶液。通过脚趾捏试验检查动物是否已达到适当的镇静平面，并确认心率和呼吸频率正常（分别为每分钟约 600 次心跳和 160 次呼吸）。
2. 使用 Betadine 和酒精湿巾准备背部皮肤的手术区域，并用无菌手术单覆盖动物（出于演示目的，省略了无菌手术单以提高能见度）。在无菌手术区域作时使用加热垫为动物保暖。
3. 使用无菌 #11 手术刀沿背侧中线从颈部底部到尾部上方约 0.5 厘米处切开。
4. 使用钝镊子，轻轻地反射远离侧面的左侧皮肤，以观察从颈部附近的肩胛脂垫到后肢上方的底层组织。
   注意: 背侧皮神经表现为白色股线，在急剧弯曲并进入皮肤下松散的结缔组织之前，它们沿尾部穿过躯干壁的半透明筋膜（图1）。
5. 在解剖光学显微镜下使用超细镊子，通过从节段在躯干壁弯曲的位置拔出到它们进入皮肤的部位，仅从位于解剖部位 T3-12 的动物左侧去除神经（图 1）。
   1. 垂直定位镊子，并通过抓住其弯曲部位下方约 0.5 厘米并向上拉来去除神经，使神经伸展并与周围组织分离（图 1C-E）。小心避免邻近血管破裂。
   2. 继续，直到从躯干壁延伸到皮肤的所有神经都被去除。不要破坏躯干壁致密筋膜内的神经。定期滴入无菌 0.9% 盐水溶液，在整个过程中保持组织湿润。
   3. 或者，通过用镊子抓住靠近躯干壁的近端并用细剪刀剪断来去除神经。之后，切断靠近皮肤的远端（图 1F-H）。最后，去除中间的神经节段（图 1I）。
6. 从步骤 1.4 中暴露的皮瓣上去除任何神经。这些纤维包括背侧皮神经的远端分支，并显示为白色分支链，零星地位于皮瓣真皮侧的结缔组织内（图 1J-K）。
   1. 要去除这些细枝，请将细镊子大致平行于真皮表面放置，抓住神经并向上拔动，以避免破坏血管和刺穿皮肤。继续作，直到所有可见的神经都被移除。
7. 使用钝性解剖，反射背侧中线切口右侧的皮肤，但不去除神经。这将作为对侧假手术对照。
8. 沿背中线以简单的间断模式缝合，以使用 6-0 尼龙缝合线闭合切口，以简单的间断模式，间距约为 3 毫米。
在
9. 完全康复之前，不要将接受过手术的小鼠放回与其他动物相同的笼子中。
10. 手术后立即监测动物，直到它们恢复意识，并且每天监测直到手术区域愈合，通常在 1 周内。如果小鼠表现出疼痛或痛苦的迹象，请按照指定的机构动物护理和使用指南使用镇痛药。手术后 7-10 天内拆线。注意:如果需要，通过在无菌水中以 1:100 稀释卡洛芬 （50 mg/ml 储备溶液） 来制备镇痛溶液。将溶液皮下注射到靠近颈部皱褶的肩胛骨之间，剂量为每 20 g 体重 200 μl（5 mg/kg 小鼠体重）。
11. 为了在手术后几周内功能上评估去神经支配的稳定性，请使用电动剪刀从背侧皮肤上去除毛发。
12. 使用皮下注射针轻轻刺破去神经支配的皮肤区域，并注意动物是否有反应，通常是颤抖或转头。如果皮肤区域已经稳定地去神经支配，动物将表现出很少或没有反应。

Results

图 1.去神经背侧皮肤的两种方法。（A） 神经支配小鼠皮肤的卡通图。红色虚线表示沿背中线进行的单个切除，以暴露躯干壁（紫色）上的潜在肌肉组织以及反射皮肤下的真皮（灰色，星号）。向尾部移动的背侧皮神经在离开躯干壁时似乎"弯曲"（黑色箭头表示此类弯曲）。要切除的神经节段用黑色虚线划定。（B） 完整神经的照片，并标明弯曲部位（箭头）。蓝色箭头指向将被移除的 2 个神经节段。（C-D）显示去神经技术的照片。使用超细镊子，抓住弯曲部位下方 0.5 厘米的神经并向外拉。（E） 照片显示切除 2 个神经节段后的体腔（蓝色箭头）。剩余的神经也需要切除。（F-I）描述了另一种神经切除方法，其中神经在其弯曲位置的近端被剪断（箭头）（G），也从远端剪断，靠近它们进入皮肤的部位（箭头）（H）。请注意，这些图像中的中线切口比典型切口长，以便更好地可视化。（J） 反射皮瓣的真皮侧到中线一侧的照片。（K） 神经被勾勒出来（黑线）...

Materials