测试手术去神经小鼠模型中的感觉神经功能

摘要

来源：Peterson, S. C. 等，皮肤外科去神经支配：一种检测神经在小鼠皮肤疾病模型中必要性的方法。J. Vis. Exp. (2016)

本视频通过手术去神经化小鼠模型的一侧并保留另一侧作为对照，演示了如何检测感觉神经功能。机械刺激的反应证实了感觉神经的作用。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 手术去神经

1. 按每20克小鼠体重200 µl的剂量，将麻醉剂溶液进行腹腔注射。通过脚趾夹捏试验检查动物是否达到适当的麻醉深度，并确认心率和呼吸频率正常（分别约为每分钟600次和160次）。
2. 使用聚维酮碘和酒精棉片准备背部皮肤的手术区域，并用无菌手术巾覆盖动物（出于演示目的，省略了无菌手术巾以提高可见性）。在无菌手术区域内操作时，使用加热垫保持动物体温。
3. 使用无菌#11手术刀沿背部中线从颈部基部至尾部上方约0.5 cm处做一切口。
4. 使用钝头镊子轻轻将左侧皮肤从侧腹区向外翻转，以观察从颈部附近的肩胛脂肪垫至后肢上方的皮下组织。
   注意：背侧皮神经表现为白色条索状结构，穿过躯干壁半透明的筋膜向尾端走行，随后突然转弯并进入皮肤下方的疏松结缔组织（图1）。
5. 在解剖显微镜下使用超细镊子，仅从动物左侧T3-12解剖位置处拔除神经，操作范围从神经在躯干壁弯曲处至其进入皮肤的部位（图1）。
   1. 将镊子垂直定位，在神经弯曲点下方约0.5 cm处夹住神经并向上牵拉，使神经拉伸并与周围组织分离（图1C-E）。注意避免损伤邻近的血管。
   2. 持续操作直至所有从躯干壁延伸至皮肤的神经均被去除。切勿破坏躯干壁致密筋膜内的神经。在整个操作过程中，定期滴加无菌0.9%氯化钠溶液以保持组织湿润。
   3. 或者，可用镊子夹住神经近端靠近躯干壁处，用精细剪刀剪断；随后在靠近皮肤处切断远端（图1F-H）；最后移除中间的神经节段（图1I）。
6. 去除第1.4步暴露的皮瓣上的任何神经。这些纤维构成背侧皮神经的远端分支，表现为在皮瓣真皮侧结缔组织中零星分布的白色分枝状条索（图1J-K）。
   1. 为去除这些细小分支，将精细镊子大致平行于真皮表面放置，夹住神经后向上拔除，以避免损伤血管或刺破皮肤。持续操作直至所有可见神经均被去除。
7. 通过钝性分离，将背侧中线切口右侧的皮肤翻起，但不切除神经。该侧将作为对侧假手术对照。
8. 使用6-0尼龙缝线，沿背侧中线以间断单纯缝合法关闭切口，缝线间距约为3 mm。
9. 术后小鼠在完全恢复前不得放回与其他动物共用的笼子中。
10. 术后立即监测动物直至其恢复意识，并在之后每日观察直至手术区域愈合，通常在1周内完成。若小鼠出现疼痛或不适迹象，应根据指定的机构动物护理与使用指南给予镇痛药物。术后7-10天内拆除缝线。注意：如需配制镇痛剂溶液，可将卡洛芬（50 mg/ml储备液）用无菌水按1:100稀释。按每20克体重200 µl（即5 mg/kg）的剂量，将溶液皮下注射于肩胛间区域颈部皮肤皱褶附近。
11. 为在术后数周内功能性评估去神经支配的稳定性，使用电动剪刀去除背部皮肤的毛发。
12. 使用皮下注射针轻轻刺击去神经支配的皮肤区域，观察动物是否出现反应（通常表现为颤抖或转头）。若该皮肤区域已稳定去神经支配，则动物几乎无反应或无反应。

结果

图1. 两种去神经支配背部皮肤的方法。 （A）受神经支配的小鼠皮肤卡通示意图。红色虚线表示沿背部中线进行的一次单一切除，以暴露体壁下方的肌肉组织（紫色）以及翻起皮肤下方的真皮层（灰色，星号）。沿尾侧走行的背侧皮神经在离开体壁时呈现“弯曲”状（黑色箭头指示其中一个弯曲处）。待切除的神经节段由黑色虚线标出。（B）完整神经的照片，显示弯曲部位（箭头）。蓝色箭头指向将被移除的两个神经节段。（C-D）显示去神经技术的照片。使用超细镊子，在神经弯曲点下方0.5 cm处夹住神经，并向外牵拉。（E）移除两个神经节段后体腔的照片（蓝色箭头）。其余神经也需被移除。（F-I）另一种神经移除方法的示意图，其中神经在其弯曲处下方近端被剪断（箭头所示）（G），并在远端靠...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
酒精消毒片	PDI	B339
镇静安（赛拉嗪）	Lloyd	NADA 139-236
聚维酮碘消毒片	Medline	MDS093917
卡洛芬（Rimadyl）	Zoetis
无线可充电剃毛器	Wahl	trimmer model 8900
6-0 尼龙缝线	DemeTECH	NL166012F4P
超细镊子	Dumont	0103-5-PO