方法文章

记录急性海马切片中的神经元场兴奋性突触后电位

2025年7月8日

本文内容

摘要

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

来源:Weng， W. 等人 记录在小体积循环、灌注和浸没型腔室系统中维持的急性海马切片中的突触可塑性。J. Vis. Exp. （2018 年）。

该视频演示了在浸没室中设置脑切片以记录突触活动的过程。该过程包括将切片固定在镜片纸上，保持人工脑脊液 （aCSF） 的连续流动以确保神经元活力，以及相对于感兴趣的特定大脑区域准确定位刺激和记录电极。这种设置允许精确监测基线突触活动和电刺激的效果。

方案

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

所有涉及动物样本的程序均已由适当的动物伦理审查委员会审查和批准。

1. 在浸没切片室中记录突触反应

注意:参见材料表。

  1. 在水浴中将 aCSF 溶液预热至约 28-30 °C（这将防止在记录室中形成气泡）。
  2. 启动回收系统 （4-5 mL/min） 并启动在线加热器以平衡系统至少 1 小时。
    3. 将
  3. 一小块镜片清洁纸和固定在 U 形铂丝上的尼龙网预先浸泡在浸没切片室中几分钟（图 1）。
  4. 取下 U 形铂丝。
  5. 关闭回收物并在镜头清洁纸上放一片。
  6. 立即将切片固定网放在切片顶部，打开泵，让切片平衡 30 分钟，不要将物镜浸入 aCSF 中。
  7. 用 aCSF（尖端电阻:1-2 MΩ，用 aCSF 填充 1/3）填充硼硅酸盐微量移液器（即记录电极）并将其安装到移液器支架中。
  8. 将经过测试的环氧树脂绝缘钨刺激电极放入机械手支架中，将参考线放入切片室中。
  9. 将第二个参考电极添加到腔室中，并将其连接到记录电极头部的参考插座（图 1A）。
  10. 在放大器控制软件中，单击"zero clamp mode"框，然后双击"output gain list"框继续。选择增益 "100"，双击 "高通滤波器列表框 （Bessel）"，选择 "0.1 Hz"，然后双击 "低通滤波器列表框 （AC）" 选择 "3 kHz"。
  11. 在录制软件中，单击"获取 |开放协议。选择一个协议，该协议的设置允许 10-20 kHz 的偶发刺激和放大电位的数字化，持续 50-100 毫秒，并在情节录制开始后 10 毫秒自动触发刺激隔离器。
  12. 例如，将刺激和记录电极与锥体层平行放置（图 1B 和图 2）。
  13. 点击"获取 |Edit Protocol"，然后选择"trigger"（触发器）选项卡（在弹出窗口中）。点击 "trigger source" 框并选择 "space bar" 作为触发源。点击 "OK" 按钮。单击 "record" 按钮开始采集，并注意带有触发按钮的弹出窗口。
  14. 在 stimulus isolator 软件中，单击 "voltage control" 框并输入 "0"。单击 "download" 按钮。单击"录制软件"窗口并按空格键。通过按顺序输入 1 到 8 的值来重复此循环，例如，在 "voltage control" 框中以 1 mV 的步长。
  15. 将刺激强度与 fEPSP 斜率值相关联，并确定获得 fEPSP 斜率最大值 40% 所需的刺激强度。单击"电压控制框"并输入确定的值。点击"下载"按钮。
    注意:刺激隔离器用于向脑组织施加短暂的电压或电流脉冲。双相脉冲每相可以有 100 μs。
  16. 在录制软件中，单击停止按钮，然后单击"获取"菜单。单击"Edit Protocol"，然后在弹出窗口中选择"trigger"选项卡。单击触发源框并选择 "internal timer" 作为触发源。点击 "OK" 按钮。例如，单击记录按钮，开始每 30 秒自动记录一次场电位。30-60 分钟后点击 "停止" 按钮。
  17. 单击 "Acquire" 菜单，单击 "Open Protocol"，选择所需的突触可塑性诱导方案，然后单击 "OK" 按钮。点击 "record" 按钮自动激活高频刺激和录音。点击"停止"按钮。
    注意:在与突触可塑性相关的研究的情况下，在长时间基线记录后应用长期增强或长期抑郁的标准诱导范式之一。图 4 和图 5 描述了突触传递的衍生调制的代表性示例。
  18. 在录制软件中，单击"获取 |Open Protocol"，然后选择与步骤 4.12 中相同的协议。单击"确定"按钮，然后单击"记录"。例如，保持自动运行场电位记录 2-4 小时。单击"停止"按钮终止录制。
  19. 在药物研究的情况下，如果需要永久化合物给药，请将化合物直接应用于 aCSF 储液器（图 3）。

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

结果

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
图 1:用于浸没切片室实验的流出-碳ogenation组分。（A） 浸没切片室的介绍。描绘了带有尼龙纤维的 U 形铂丝，该铂丝固定着海马切片。银线缠绕在一个小套管上，形成一个线圈以增加银线末端的面积。刺激参考线放置在流出室中，记录参考位于主室中。为了在不同液位下保持参比电极电位稳定，记录参比线可以用塑料管绝缘，只留下线的"水下"部分暴露在缓冲器中。（B） 明场图像显示了具有代表性的急性海马切片和电极。CA1， CA3: 山茱萸 1， 3;DG: 齿状回;sub: subiculum;EC: 内嗅皮层。（C） 示意图突出显示了流出-碳化作用的主要成分，但没有指示碳化氢泵和蠕动泵的流量计。低通过滤器可以放置在在线加热器的正前方，以减少 aCSF 流的脉动。

访问受限。请登录或开始试用以查看此内容。

材料

<表格border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"> 本文使用的材料清单 姓名 公司 目录编号 评论 电生理设备和材料 立式移液器拉拔器 Narishige， 日本 PC-10 系列 隔振台 Meirits， 日本 ADZ-A0806 浸没式记录室 华纳仪器 RC-26GLP 恒温水浴 Zhongcheng Yiqi， 中国 HH-1型 4 轴显微作器 Sutter， 美国 MP-285、MP-225 铂丝 世界精密仪器 PTP406 放大器 美国 Molecular Devices 多夹具 700B 数据采集系统 美国 Molecular Devices 迪迪特 1440A Anaysis 软件 美国 Molecular Devices 钳形 10.2 荧光显微镜 Nikon， 日本 FN1 系列 LED 光源 Lumen Dynamics Group， 加拿大 X-cite 120LED 指示灯 微量移液器 哈佛仪器 GC150TF 细胞外记录 硼硅酸盐微量移液器 Sutter， 美国 BF150-86型 膜片钳 钨电极 美国 A-M Systems 575500 蠕动泵 Longer， 中国 BT00-300T 系列 蠕动泵管 ISMATEC， 德国 韦特海姆 编号 SC0309 1x 进水口，内径:1.02 mm 蠕动泵管 ISMATEC， 德国 韦特海姆 编号 SC0319 2 根流出管，内径:2.79 mm CCD 摄像头 PCO， 德国 pco.edge sCMOS 镜头清洁纸 柯达 50 ml 锥形离心管 Thermo Scientific 公司 339652 前室 华纳仪器 BSC-PC 系列 直列式加热器 华纳仪器 SF-28 系列 温度控制器 华纳仪器 TC-324B 系列 所需试剂 氯化钠 国药集团化学试剂，
中国 10019318 氯化钾 国药集团化学试剂，
中国 10016318 KH2PO4 国药集团化学试剂，
中国 10017618 氯化镁2·6H2O 国药集团化学试剂，
中国 10012818 氯化钙2 国药集团化学试剂，
中国 10005861 氯化钠3 国药集团化学试剂，
中国 10018960 葡萄糖 国药集团化学试剂，
中国 10010518 NaH2PO4 国药集团化学试剂，
中国 20040718 HEPES 系列 西格马 H3375 丙酮酸钠 西格马 编号 A4043 硫酸镁4 国药集团化学试剂，
中国 20025118 氢氧化钠 国药集团化学试剂，
中国 10019718

重印与许可

申请许可以重复使用本 JoVE 文章的文本或图表

申请许可

标签

相关文章