小鼠视网膜色素上皮层的直接耦合视网膜电图记录 关键词：视网膜色素上皮，视网膜电图，ERG，RPE，小鼠，电生理学，直接耦合记录

摘要

来源：Miyagishima, K. J.，等。用于记录小鼠视网膜色素上皮光诱发电反应的直接耦合视网膜电图（DC-ERG）。J. Vis. Exp. (2020)。

本视频演示了在暗适应、麻醉状态下的小鼠视网膜色素上皮（RPE）上记录直接耦合视网膜电图（DC-ERG）的过程。滴入散瞳滴眼液后，将动物置于记录装置中，并将充满盐缓冲液的毛细管电极放置在角膜上。在建立基线后，开始记录DC-ERG。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 小鼠和电极定位

1. 将小鼠置于通风良好、避光的盒子中过夜，以进行暗适应。
2. 通过腹腔注射氯胺酮（80 mg/kg）和赛拉嗪（8 mg/kg）对动物进行麻醉。
3. 在角膜表面滴加一滴0.5%盐酸丙帕卡因以局部麻醉，同时滴加一滴2.5%盐酸去氧肾上腺素和0.5%托吡卡胺以散大瞳孔。
4. 用剪刀修剪小鼠胡须，防止其意外抽动干扰记录过程中玻璃毛细管电极的稳定性。
   注意： 视网膜电图（ERG）系统中的直接耦合视网膜电图（DC-ERG）刺激程序包含多个内置刺激方案，可通过点击“Step”（前进箭头）或“Step”（后退箭头）进行选择。软件中仅需使用第1、4、5步即可完成DC-ERG记录的准备与实施。
5. 在ERG系统中，软件需确认已选择正确的受试对象。点击绿色的“Protocols”按钮，在“Protocol Description”下选择“DC-ERG”，然后点击“Run”。通过点击“Yes”确认正在进行的测试项目正确无误。
6. 使用第1/6步指定的红光刺激，开启圆顶内的红光，以便在观察阻抗变化的同时调整小鼠和电极的位置。
7. 将小鼠放置在加热的记录台上，用镊子轻轻提起后肢皮肤，一手牢固握住针电极，将其皮下插入后肢并固定到位。
8. 将参考银/氯化银（Ag/AgCl）电极（材料表）置于口腔内，使烧结小球紧贴颊后部，并固定于牙齿后方。
   注意： 不应使用金丝电极作为口腔参考电极，因其具有不同的阻抗特性，会增加峰-峰值噪声。
9. 在将毛细管电极放置于小鼠眼部之前，将装有玻璃毛细管的电极夹持器垂直持握，并用食指轻弹电极夹持器，以去除可能引入的气泡。使用连接注射器的25 G针头将汉克斯平衡盐溶液（HBSS）注入电极尖端，并检查确认尖端无气泡残留。调整电极架位置，使充满HBSS的毛细管开口端轻轻接触角膜。
10. 操作时需特别注意避免引入气泡：将润滑眼用凝胶的分配器倒置，并弃去最初几滴。在每只眼睛上滴加一滴润滑眼用凝胶，以维持导电性并防止记录期间角膜干燥。

2. 直流眼电图（DC-ERG）记录

1. 点击“下一步”（前进箭头）以选择第 4/6 步“长闪光无光适应”（Long Flash No-Li）。
2. 点击“阻抗”（Impedance）。使用阻抗检测界面检查左右眼的电阻。预期每只眼记录电极的阻抗值应相近（约 39 kΩ）。接地电极和参考电极的阻抗值应低于 10 kΩ。
3. 点击“预览”（Preview）以查看左右眼的记录轨迹。等待稳定基线的形成（<10 分钟）。点击“停止”（Stop）退出轨迹预览。
   注意：若记录中出现漂移方向的突然变化或异常噪声，此类问题不会随时间改善，需识别出需要处理的毛细管电极。最常见的原因是电极尖端引入了气泡。请用 HBSS 重新填充电极尖端。再次点击“预览”以检查基线。
4. 点击“下一步”（前进箭头）以选择第 5/6 步“长闪光 10 cd 7 分钟”（Long Flash 10 cd 7 min）。点击“运行”（Run）开始记录。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
Ag/AgCl（口腔）电极	WPI 公司	EP1	小鼠口腔参考电极
陶瓷砖	Sutter Instrument	CTS	用于将玻璃毛细管切割至合适尺寸
棉签清洁棒	Puritan Medical Products	867-WC 无胶	用作间隔件，以改善电极夹持组件的适配性
视网膜电图（ERG）系统	Diagnosys LLC	E3 系统	用于视觉研究和药物试验中诊断眼科疾病的视觉电生理系统
本生灯	Argos Technologies	BW20002460	或在火焰下塑形玻璃的等效方法
玻璃毛细管（1.5 mm）	Sutter Instruments	BF150-75	用于填充 HBSS 并与角膜接触
Hank's 平衡盐溶液 (HBSS)	赛默飞世尔科技公司	14175-095	商品化供应，室温保存
在线过滤器	Whatman	6722-5001	防止气溶胶污染真空泵
用于微电极架的低噪声电缆	WPI 公司	5372	建议用于改进电缆和电极支架组件的长度与放置位置
磁性球形关节	WPI 公司	500871	用于在载物台上通过磁力定位电极夹持装置组件
MatLab	Mathworks		MatLab：用于编辑分析软件
Matlab 曲线拟合工具箱	Mathworks		MatLab 工具箱（仅在编辑分析软件时需要）
MatLab 编译器	Mathworks		MatLab 工具箱（仅在编辑和重新发布分析软件时需要）
MatLab Runtime 版本 9.5	Mathworks	R2018b (9.5)	运行分析软件所需：https://www.mathworks.com/products/compiler/matlab-runtime.html
微电极夹持器（45度）	WPI 公司	MEH345-15	用于固定毛细管
针头（25 号）	Covidien	8881250313	用于用HBSS填充毛细管
针状（接地）电极	Rhythmlink	13毫米——一个电极	皮下针状电极（接地用），适用于小鼠（针长13 mm，直径0.4 mm，导线长1.5 m）
稳压器/电源调节器	弗尔曼	P-1800	或等效方法，用于消除因电源线引入噪声而产生的直流偏移
注射器（12 mL）	Monoject	1181200777	用于用 HBSS 填充毛细管
T型夹	Cole-Parmer	06852-20	电极夹具组装
真空干燥器	Bel-Art	420120000	透明聚碳酸酯底部 & 封面
药物治疗
润滑性眼用凝胶	Alcon	0078-0429-47	有助于润滑角膜表面，并维持与毛细管电极的电接触
盐酸去氧肾上腺素 2.5%	阿克恩	17478-201-15	短效散瞳眼药水（用于瞳孔扩张）
盐酸丙帕他卡因 0.5%	阿克恩	17478-263-12	用于眼科滴注的局部麻醉剂
0.5% 托吡卡胺	Akorn	17478-101-12	短效散瞳眼药水（用于瞳孔扩张）
赛拉嗪	AnaSed	sc-362949Rx	镇痛药和肌肉松弛剂
氯胺酮（盐酸氯胺酮）	VetOne	501072	用于肌肉注射的麻醉剂