小鼠脑楔形切片中的听觉神经根刺激和突触后电流记录

Abstract

来源:Fischl， MJ 等人 模拟体内神经元回路连接的体外楔形切片制备。J. Vis. Exp.（2020 年）

该视频演示了在小鼠脑楔形切片中刺激听觉神经根和记录内侧耳蜗神经元突触后电流的方案。

Protocol

所有涉及动物样本的程序均已由适当的动物伦理审查委员会审查和批准。

1. 电生理学设置和记录

1. 将楔形切片放入记录室中，并用竖琴或稳定系统固定切片。以 7-10 mL/min 的速率用鼓泡有碳水化合物的温热 （35 °C） ACSF 连续灌注组织。
2. 使用具有 561 nm 发射滤光片的落射荧光识别梯形体 VNTB 腹侧核中遗传标记的内侧橄榄耳蜗 MOC 神经元，以进行膜片钳记录。如果没有潜在的可修补单元格，则翻转切片。
3. 使用 DIC 光学器件，聚焦在切片较厚一侧的听觉神经根上，并使用显微作器将双极钨刺激电极向下移动到听觉神经根，然后轻轻地进入组织表面。
   注意:抽吸电极已用于其他实验室的听觉神经刺激实验。如果适用于其他特定制剂，可以采用 θ 玻璃电极或光刺激方法。
4. 将视野移回 VNTB 以选择膜片钳电生理学的目标 MOC 神经元。
5. 在记录移液器中加入适合拟议实验的内部溶液。
6. 在全细胞配置中从 MOC 神经元进行修补和记录。如果需要，补偿膜电容和串联电阻。
7. 调整听觉神经根的电刺激幅度，以在 MOC 神经元中获得一致的突触后事件。
   注意: 可能需要移动刺激电极。
8. 运行适当的刺激方案以观察 MOC 中诱发的突触电流（电压钳）。
   注意: 楔形切片制备可与任何典型的膜片钳工具一起使用，例如松散的膜片记录、药理学、光遗传学、钙成像、神经递质解笼等。

Materials