对小鼠脑部实施创伤性脑损伤

摘要

来源：Zhong, J.，等 利用双光子显微镜对小鼠闭合性颅脑损伤及颅窗模型中荧光蛋白表达进行活体成像。J. Vis. Exp. (2023)

本视频展示了在小鼠中实施创伤性脑损伤（TBI）的方法。暴露颅骨后，标记TBI作用部位。将小鼠置于TBI装置下方，通过提起金属杆并使其自由下落撞击与颅骨接触的冲击头，从而产生冲击损伤。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 重复性创伤性脑损伤（TBI）诱导的实施

注意：TBI 参数根据以往报告进行调整，以往报告中 TBI 冲击仅施加一次。本方案采用相同参数，但将总冲击次数增加至 10 次。

1. 创伤性脑损伤（TBI）设备
   1. 使用定制的便携式设备，按照图1B所示，在小鼠头部右侧施加闭合性颅脑创伤（TBI）（图1A）。
2. 术前准备
   1. 对包括普通剪刀、手术卡尺、弹簧剪、手术镊、蚊式钳、头固定件、纱布和棉签在内的手术器械进行高压灭菌处理。
   2. 术前2小时称量并记录小鼠体重。为减少颅窗植入过程中脑水肿的发生，使用胰岛素注射器向股四头肌注射地塞米松磷酸钠，剂量为4.8 mg/kg [2 mg/mL，通常约为70 µl（需在两个位点注射）]。注射地塞米松后，在开始TBI手术前，按照步骤2.1准备玻璃窗以供后续使用。
   3. 使用75%乙醇对手术台和TBI设备进行消毒。展开一次性无菌手术巾，覆盖在立体定位仪平台的手术台上。打开加热装置和温度监测仪，将目标温度设定为37 °C。
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结果

图1：TBI装置、TBI撞击部位及窗片制备示意图。 （A）自由落体TBI装置的设备。1：底座，2：支架，3：可调夹具，4：尼龙绳，5：重物下落通道，6：金属重锤柱（50 g），7：撞击头，8：缓冲垫。（B）病毒注射与TBI撞击部位的示意图，坐标位于前囟后方2.5 mm，矢状缝右侧2 mm处。（C）玻璃窗制备示意图。使用光学胶将直径分别为3 mm和5 mm的两片玻璃盖玻片粘合在一起。（D）金属头固定柱与成像腔室的照片。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
可调节精密涂抹刷	Parkell	S379
BD 胰岛素注射器	BD	NDC/HRI#08290-3284-38	5/16" x 31G
聚维酮碘	Purdue	NDC67618-151-17	含 7.5% 聚维酮碘
丁丙诺啡	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05
乙醇	Fisher Scientific	04355223EA	75%
加热装置	CWE	TC-1000 Mouse	配备立体定位仪，用于手术过程中维持体温
加热垫	CVS pharmacy	E12107	术后使用的额外加热设备
眼用润滑软膏	Picetal	NDC 46066-753-55
标记笔	Delasco	SMP-BK
蚊式止血钳	CAROLINA	Item #:625314	不锈钢，弯型，5 英寸
脱毛剂	McKesson Corporation	N/A	Nair Hair Aloe & Lanolin 脱毛乳液
普通剪刀 1	Eurostat	eurostat es5-300
普通剪刀 2	World Precision Instruments	No. 501759-G
生理盐水	Bioworld	L19102411PR
弹簧剪刀 1	World Precision Instruments	No. 91500-09	直头
弹簧剪刀 2	World Precision Instruments	No. 91501-09	直头
立体定位平台	KOPF	Model 900LS
手术镊 1	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	Catlog# 0508-5/45-PO	型号 5/45，弯型
手术镊 2	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	catlog# 0103-5-PO	型号 5，直型
手术镊 3	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	catlog# 72912
手术镊 4	ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES	Catlog# 0508-5/45-PO	型号 5/45，弯型
手术灯	Leica	Leica KL300 LED
Vetbond 组织粘合剂	3M Animal Care	Part Number:014006