脑室内注射分析小鼠巨细胞病毒在新生小鼠大脑中的分布

Abstract

来源:Kawasaki， H. 等人 脑室内和血管内将病毒颗粒和荧光微珠注射到新生儿大脑中。J. Vis. Exp. （2016 年）。

该视频演示了用于研究小鼠巨细胞病毒 （MCMV） 在新生小鼠大脑中分布的脑室内注射过程。MCMV 经过工程改造，可表达增强型绿色荧光蛋白 （EGFP） 以提高可见度，被注射到小鼠幼崽大脑的侧脑室中。注射的病毒在脑脊液中循环，感染脑室周围区域的细胞，包括边缘区、脉络丛和脑室下区。

Protocol

1. ICV 将 MCMV 和荧光微珠注射到新生小鼠体内

1. 将正常的怀孕 ICR 小鼠维持在温度受控的设施中，进行 12 小时的光照/黑暗循环。新生儿在出生当天被指定为 P 0.5。
2. 用 10% 酒精对 10 μl 注射器和 27 G 针头进行消毒。
3. 小心地拉动注射器的柱塞，将含有 MCMV 或荧光微珠的注射液 （5 μl） 装入针头中。
4. 通过将小鼠置于冰上 3 - 4 分钟来抑制新生小鼠 （P 0.5）。一旦动物处于麻醉状态，使用脚趾捏合反应法来确定麻醉深度。
5. 用无毒实验室笔在矢状缝外侧约 0.7 - 1.0 毫米和新生儿前囟尾部 0.7 - 1.0 毫米的位置标记注射部位（图 1A）。
6. 将针头插入 2 毫米深，垂直于标记注射部位的颅骨表面。作为参考，用无毒的制造器在距针尖 2 毫米处标记。
7. 将 5 μl MCMV（大约 5 × 10⁵ PFU）缓慢注射到侧脑室中，而不打开头皮（图 1B）。
8. 在另一组小鼠中，用相同的方法注射含有荧光微珠（0.1 - 0.3 μm，约 5.75 × 10⁸ 个颗粒）的 5 μl 溶液。
9. 停止柱塞运动后 10 - 20 秒缓慢取出针头，以防止回流。
10. 为了恢复....

Results

图 1:新生小鼠的注射部位。（一、二）ICV 注射 5 μl MCMV（约 5 × 10⁵ PFU）或 5 μl 微珠（约 5.75 × 10⁹ 个颗粒）。（A） 注射部位位于耳朵和眼睛之间的中点（位于矢状缝外侧约 0.7 - 1.0 毫米的位置，距离新生儿前囟尾约 0.7 - 1.0 毫米的位置）。（B） 使用 27 G 针头和 10 μl 注射器注射到 2 mm 深的侧脑室中，垂直于颅骨表面。（C、D）将 MCMV 或微珠注射到新生小鼠的颞侧面部静脉中。（C） 透射仪（静脉探测器）用于可视化浅表颞（面部）静脉。（D） 使用带有 35 G 针头的 1 ml 注射器进行 MCMV 的静脉注射。

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Materials