通过脑室内注射分析新生小鼠脑内小鼠巨细胞病毒分布

摘要

来源：Kawasaki, H., 等. 向新生小鼠脑内脑室及血管注射病毒颗粒与荧光微珠. J. Vis. Exp. (2016).

本视频演示了脑室内注射以研究小鼠巨细胞病毒（MCMV）在新生小鼠脑组织中的分布。经基因工程改造后可表达增强型绿色荧光蛋白（EGFP）以便观察的MCMV，被注射至幼鼠脑的侧脑室。注射后的病毒通过脑脊液循环，感染脑室周围区域的细胞，包括边缘带、脉络丛和室下区。

方案

1. 新生小鼠脑室内注射MCMV和荧光微珠

1. 将怀孕的ICR小鼠饲养在温度受控的环境中，保持12小时光照/12小时黑暗的循环。出生当天记为P 0.5。
2. 用70%乙醇对10 µl注射器和27 G针头进行灭菌。
3. 通过缓慢拉动注射器活塞，将含有MCMV或荧光微珠的注射液（5 µl）吸入针头中。
4. 将新生小鼠（P 0.5）置于冰上3–4分钟以进行固定。待动物进入麻醉状态后，使用脚趾夹捏反应法评估麻醉深度。
5. 使用无毒实验室记号笔标记注射位点，位置约为矢状缝外侧0.7–1.0 mm，新生儿前囟后方0.7–1.0 mm处（图1A）。
6. 在标记的注射位点，将针头垂直刺入颅骨表面以下2 mm深度。作为参考，可用无毒记号笔在针尖上方2 mm处做标记。
7. 缓慢将5 µl MCMV（约5 × 10⁵ PFU）注入侧脑室，无需切开头皮（图1B）。
8. 在另一组小鼠中，采用相同方法注射含荧光微珠（0.1–0.3 µm，约5.75 × 10⁸ 个颗粒）的5 µl溶液。
9. 停止推动活塞后10–20秒内缓慢拔出针头，以防止液体回流。
10. 将小鼠置于温暖容器中恢复5–10分钟，直至其活动能力和整体反应性恢复正常。
11. 在注射后不同时间点（3、12、24、48和72小时）取脑组织。

结果

图 1：新生小鼠的注射位点。 （A, B）向侧脑室注射 5 µl MCMV（约 5 × 10⁵ PFU）或 5 µl 微珠（约 5.75 × 10⁹ 颗粒）。（A） 注射位点位于耳部与眼部之间的中点（大约在矢状缝外侧 0.7 - 1.0 mm，以及新生儿前囟后方 0.7 - 1.0 mm 处）。（B） 使用带 10 µl 注射器的 27 G 针头，垂直于颅骨表面插入 2 mm 深度，将物质注入侧脑室。（C, D）将 MCMV 或微珠注射至新生小鼠的颞浅面部静脉。（C） 使用透照仪（静脉定位仪）以...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
SPHERO TM 荧光聚苯乙烯尼罗红 0.04-0.06	Spherotech, Inc.	FP-00556-2
SPHERO TM 荧光聚苯乙烯尼罗红 0.1-0.3	Spherotech, Inc.	FP-0256-2
SPHERO TM 荧光聚苯乙烯尼罗红 1.7-2.2	Spherotech, inc.	FP-2056-2
10% 小鼠血清	DAKO	X0910
C57BL/6 小鼠	SLC, Inc.
ICR 小鼠	SLC, Inc.
改良型微量注射器（7000 系列）	Hamilton company
35 号针头	Saito Medical
pEGFP-N1 载体	Clontech	#6085-1