使用小胶质细胞作为替代生物传感器确定神经元中纳米颗粒诱导的毒性

摘要

来源:Duffy， CM et al.， 小胶质细胞作为替代生物传感器来确定纳米颗粒神经毒性。J. Vis. Exp. （2016 年）。

该视频演示了一种使用小胶质细胞评估纳米颗粒神经毒性作用的方法。它概述了用纳米颗粒激活小胶质细胞、过滤条件培养基以分离小胶质细胞衍生的促炎细胞因子以及使用条件培养基测试下丘脑神经元毒性的步骤。

方案

1. 小胶质细胞培养维持

1. 温热细胞培养基（Dulbecco's Modified Eagle 培养基;DMEM） 补充有 10% 胎牛血清 （FBS） 和 1% 青霉素/链霉素/新霉素 （PSN） 至 37 °C。
2. 从 -80 °C 的储存中获得第 18 - 25 代的 BV2 小胶质细胞的冷冻储备液。在 37 °C 水浴中快速解冻细胞。
3. 轻轻地将细胞转移到含有 10 ml 细胞培养基的 75 cm² 通气瓶中。
4. 将培养瓶置于 37 °C 的 5% CO₂ 中孵育。24 小时后吸出培养基，并更换为新鲜培养基。培养细胞直至大约 70 - 80% 汇合。

2. 细胞计数和电镀

1. 在 37 °C 水浴中，加热 DMEM 和 1x-胰蛋白酶-乙二胺四乙酸 （EDTA） 溶液。
2. 从细胞中吸出培养基并加入 500 μl 胰蛋白酶。在 37°C 下孵育 2 - 5 分钟。
3. 使用刮刀从培养瓶中取出细胞并悬浮在 5 ml DMEM 中。将细胞通过 70 μm 过滤器放入 50 ml 试管中 3 次。
4. 使用血细胞计数器计数细胞，并将 8,000 个细胞/孔接种在黑壁透明底板中，最终体积为 200 μl DME....

材料