小鼠模型中实验性自身免疫性脑脊髓炎的产生

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. EAE 归纳

1. 使用蒸发器系统用异氟烷麻醉 C57BL/6 小鼠。为了在小鼠中诱导麻醉，在将小鼠转移到含有 2.1% 异氟烷的面罩之前，将小鼠暴露在小型孵化室中暴露于 4.5% 异氟烷的氧气中。使用配备加热垫的麻醉装置，以防止小鼠体温过低。
2. 用一只手固定麻醉的小鼠，首先将 30 μL 髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 （MOG） - 肽 aa_35-55 （MOG_35-55）/完全弗氏佐剂 （CFA） 乳剂皮下注射到靠近腹股沟淋巴结的后腿侧面（图 1:1 + 2;总共 60 μL;左侧 30 μL 和右侧 30 μL）靠近腹股沟淋巴结。
3. 将小鼠放在肚子上，将 20 μL 的 MOGaa_35-55/CFA 乳剂注入到小鼠尾根的左右软脂肪组织中（图 1:3 + 4;总共 40 μL;左侧尾根 20 μL 和右侧尾根 20 μL）和一小滴 MOGaa_35-55/CFA 乳剂进入小鼠的颈部（图 1: 5）.
4. 将 100 μL 百日咳毒素 （PTx） 溶液腹膜内注射到小鼠体内。将鼠标的头部保持在身体中心下方，以避免注射到肠道中。
5. 将维持日粮（挤出主要营养物质:粗蛋白 18.5%;粗脂肪 4.5%;粗纤维 4.5%;粗灰分 6.5%;淀粉 35%;代谢能:13.1 MJ/kg）替换为育种日粮（挤出主要营养物质:粗蛋白 23.5%;粗脂肪 5.5%;粗纤维 3%;粗灰分 5.7%;淀粉 36%;代谢能:14.3 MJ/kg），以便在预期的临床疾病之前和期间为小鼠提供能量含量更高的食物。
6. 取下面罩，用加热垫将鼠标转移到其家用笼子上。10 分钟后，确保鼠标完全清醒并可以活动。
7. 第一次治疗后 48 小时重复 PTx 注射（步骤 1.4）。

2. EAE 小鼠的评分

1. 每天早上通过查看笼子内部来检查 EAE 小鼠的健康状况。
2. 每天下午对 EAE 小鼠进行评分。
3. 将 EAE 实验中包含的每只小鼠从笼子中取出，并用手指向上移动尾巴，检查尾巴是否有张力。一只健康的老鼠会保持尾巴向上（尾巴有一个张力）。如果临床 EAE 已经开始，尾部张力会更低，从尾部逐渐下降可以看出。最终，老鼠将根本无法抬起它的尾巴。
4. 将 EAE 实验中包含的每只小鼠放在洁净工作台上，观察和记录行走行为。有关评估疾病严重程度（EAE 评分）的评分标准，请参见表 1。
5. 评估并记录实验中包括的每只小鼠的体重。
6. 为确保临床 EAE 评分为 1 的小鼠摄入足够的食物和水，在笼子底部的塑料盘中供应湿润的食物，并每天刷新。

图 1:EAE 诱导进样部位的图形表示。1） 将 30 μL MOG 乳剂注入右侧，2） 将 30 μL MOG 乳剂注入左侧腹部的进样部位，3） 将 20 μL MOG 乳剂注入左尾根的进样部位，4） 将 30 μL MOG 乳剂注入右尾根的进样部位， 5） 将一小滴 MOG 乳剂注射到颈部。

表 1:评估 EAE 疾病严重程度的评分标准。