来源：Tietz, S. M. 等. 在实验性自身免疫性脑脊髓炎体内模型中可视化神经血管单元的内皮和胶质屏障损伤. J. Vis. Exp. (2019)
本视频演示了通过注射髓鞘来源的多肽并联合佐剂以激活自身反应性T细胞来诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的方法。这些T细胞会迁移至脑部。同时给予百日咳毒素以增加血脑屏障的通透性，使这些T细胞及其他免疫细胞得以进入脑组织。这些免疫细胞引发脱髓鞘，导致神经传导受损，从而诱发EAE。
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方法文章
小鼠模型中实验性自身免疫性脑脊髓炎的诱导
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2025年7月8日
本文内容
摘要
方案
所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。
1. EAE 诱导
- 使用异氟烷麻醉机系统对C57BL/6小鼠进行麻醉。诱导麻醉时，先将小鼠置于小型麻醉诱导舱内，吸入含4.5%异氟烷的氧气，随后转移至面罩，维持2.1%异氟烷吸入。使用配备加热垫的麻醉装置，以防止小鼠体温过低。
- 用一只手固定麻醉后的小鼠，首先在靠近腹股沟淋巴结的后肢侧腹部皮下注射30 µL髓鞘寡突胶质细胞糖蛋白（MOG）肽段aa35-55（MOG35-55）与完全弗氏佐剂（CFA）的乳化液（图1：1 + 2；总量60 µL；左侧腹部30 µL，右侧腹部30 µL）。
- 将小鼠俯卧放置，于尾根部左右两侧柔软脂肪组织内各注射20 µL MOGaa35-55/CFA乳化液（图1：3 + 4；总量40 µL；尾根左侧20 µL，尾根右侧20 µL），并在小鼠颈部滴注少量MOGaa35-55/CFA乳化液（图1：5）。
- 向小鼠腹腔内注射100 µL百日咳毒素（PTx）溶液。操作时将小鼠头部置于身体下方，避免刺入肠道。
- 在预期发病期前后，将维持饲料（挤压颗粒主要营养成分：粗蛋白18.5%；粗脂肪4.5%；粗纤维4.5%；粗灰分6.5%；淀粉35%；代谢能13.1 MJ/kg）更换为繁殖饲料（挤压颗粒主要营养成分：粗蛋白23.5%；粗脂肪5.5%；粗纤维3%；粗灰分5.7%；淀粉36%；代谢能14.3 MJ/kg），以提供更高能量的食物。
- 取下面罩，将小鼠转移至带有加热垫的饲养笼中。10分钟后确认小鼠已完全清醒并能自由活动。
- 在首次处理48小时后，重复进行一次百日咳毒素（PTx）注射（步骤1.4）。
2. EAE 小鼠评分
- 每天早上通过观察笼内情况检查EAE小鼠的健康状况。
- 每天下午对EAE小鼠进行评分。
- 将EAE实验中每只小鼠从笼中取出，用手指向上轻抬其尾巴，检查尾巴是否具有张力。健康小鼠的尾巴会保持上翘（即具有张力）。若临床EAE已开始，尾巴张力会降低，表现为尾巴逐渐下垂；最终小鼠将完全无法抬起尾巴。
- 将EAE实验中的每只小鼠放置于洁净台面上，观察并记录其行走行为。疾病严重程度的评分标准（EAE评分）见表1。
- 评估并记录实验中每只小鼠的体重。
- 为确保临床EAE评分为1分的小鼠能充分摄取食物和水，应在笼底放置塑料皿提供湿润饲料，并每日更新。
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结果
图1：EAE诱导注射位点的示意图。1) 将30 µL MOG乳剂注射至右侧侧腹，2) 将30 µL MOG乳剂注射至左侧侧腹，3) 将20 µL MOG乳剂注射至左侧尾根，4) 将30 µL MOG乳剂注射至右侧尾根，5) 在颈部注射少量MOG乳剂滴液。
表1：EAE疾病严重程度评估的评分标准。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 繁殖用饲料 | 例如 PROVIMI KLIBA SA | 3336 | |
| 独立通风笼具，蓝色线II型或III型 | 例如 Tecniplast | 1145T, 1285L | |
| 雌性C57BL/6J小鼠（8–12周龄） | 例如 Janvier Labs | 雌性，8–12周龄 | |
| 18G × 1½'' (1.2 mm × 40 mm) 注射针头 | 例如 BD, BD Microlance 3 | 304622 | |
| 27G × ¾'' – Nr. 20 (0.4 mm × 19 mm) 注射针头 | 例如 BD, BD Microlance 3 | 302200 | |
| 30G × ½'' (0.3 mm × 13 mm) 注射针头 | 例如 BD, BD Microlance 3 | 304000 | |
| 不完全弗氏佐剂（IFA） | 例如 Santa Cruz Biotechnology | sc-24648 | 4°C 保存 |
| 维持用饲料 | 例如 PROVIMI KLIBA SA | 3436 | |
| MOGaa35-55 肽 | 例如 GenScript | –80 °C 保存 | |
| Mycobacterium tuberculosis H37RA | 例如 BD | 231141 | 4 °C 保存 |
| 0.9 % NaCl | B. Braun | 3535789 | |
| Omnican 50 30G × ½'' | B. Braun | 9151125S | |
| 百日咳毒素 | 例如 List biological laboratories, Inc. | 180 | 4 °C 保存 |
| 手术剪 | F.S.T | 15012-12 | |
| 1 ml 注射器 | 例如 PRIMO | 62.1002 | |
| 10 ml 注射器 | 例如 CODAN Medical ApS | 2022-05 |
