小鼠模型中实验性自身免疫性脑脊髓炎的诱导

摘要

来源：Tietz, S. M. 等. 在实验性自身免疫性脑脊髓炎体内模型中可视化神经血管单元的内皮和胶质屏障损伤. J. Vis. Exp. (2019)

本视频演示了通过注射髓鞘来源的多肽并联合佐剂以激活自身反应性T细胞来诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的方法。这些T细胞会迁移至脑部。同时给予百日咳毒素以增加血脑屏障的通透性，使这些T细胞及其他免疫细胞得以进入脑组织。这些免疫细胞引发脱髓鞘，导致神经传导受损，从而诱发EAE。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. EAE 诱导

1. 使用异氟烷麻醉机系统对C57BL/6小鼠进行麻醉。诱导麻醉时，先将小鼠置于小型麻醉诱导舱内，吸入含4.5%异氟烷的氧气，随后转移至面罩，维持2.1%异氟烷吸入。使用配备加热垫的麻醉装置，以防止小鼠体温过低。
2. 用一只手固定麻醉后的小鼠，首先在靠近腹股沟淋巴结的后肢侧腹部皮下注射30 µL髓鞘寡突胶质细胞糖蛋白（MOG）肽段aa_35-55（MOG_35-55）与完全弗氏佐剂（CFA）的乳化液（图1：1 + 2；总量60 µL；左侧腹部30 µL，右侧腹部30 µL）。
3. 将小鼠俯卧放置，于尾根部左右两侧柔软脂肪组织内各注射20 µL MOGaa_35-55/CFA乳化液（图1：3 + 4；总量40 µL；尾根左侧20 µL，尾根右侧20 µL），并在小鼠颈部滴注少量MOGaa_35-55/CFA乳化液（图1：5）。
4. 向小鼠腹腔内注射100 µL百日咳毒素（PTx）溶液。操作时将小鼠头部置于身体下方，避免刺入肠道。
5. 在预期发病期前后，将维持饲料（挤压颗粒主....

结果

图1：EAE诱导注射位点的示意图。1) 将30 µL MOG乳剂注射至右侧侧腹，2) 将30 µL MOG乳剂注射至左侧侧腹，3) 将20 µL MOG乳剂注射至左侧尾根，4) 将30 µL MOG乳剂注射至右侧尾根，5) 在颈部注射少量MOG乳剂滴液。

表1：EAE疾病严重程度评估的评分标准。

0 到 3 分评分.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
繁殖用饲料	例如 PROVIMI KLIBA SA	3336
独立通风笼具，蓝色线II型或III型	例如 Tecniplast	1145T, 1285L
雌性C57BL/6J小鼠（8–12周龄）	例如 Janvier Labs		雌性，8–12周龄
18G × 1½'' (1.2 mm × 40 mm) 注射针头	例如 BD, BD Microlance 3	304622
27G × ¾'' – Nr. 20 (0.4 mm × 19 mm) 注射针头	例如 BD, BD Microlance 3	302200
30G × ½'' (0.3 mm × 13 mm) 注射针头	例如 BD, BD Microlance 3	304000
不完全弗氏佐剂（IFA）	例如 Santa Cruz Biotechnology	sc-24648	4°C 保存
维持用饲料	例如 PROVIMI KLIBA SA	3436
MOGaa35-55 肽	例如 GenScript		–80 °C 保存
Mycobacterium tuberculosis H37RA	例如 BD	231141	4 °C 保存
0.9 % NaCl	B. Braun	3535789
Omnican 50 30G × ½''	B. Braun	9151125S
百日咳毒素	例如 List biological laboratories, Inc.	180	4 °C 保存
手术剪	F.S.T	15012-12
1 ml 注射器	例如 PRIMO	62.1002
10 ml 注射器	例如 CODAN Medical ApS	2022-05