小鼠模型中实验性自身免疫性脑脊髓炎的产生

Abstract

来源:Tietz， SM et al. 在体内实验性自身免疫性脑脊髓炎期间可视化神经血管单位内皮和神经胶质屏障的损伤。 （2019 年）

该视频演示了通过注射髓鞘衍生肽和佐剂来激活自身反应性 T 细胞（迁移到大脑）来诱导实验性自身免疫性脑脊髓炎 （EAE） 的方法。百日咳毒素用于增加血脑屏障通透性，使这些 T 细胞和其他免疫细胞能够进入大脑。这些免疫细胞导致脱髓鞘，导致神经传递受损和 EAE 的发展。

Protocol

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. EAE 归纳

1. 使用蒸发器系统用异氟烷麻醉 C57BL/6 小鼠。为了在小鼠中诱导麻醉，在将小鼠转移到含有 2.1% 异氟烷的面罩之前，将小鼠暴露在小型孵化室中暴露于 4.5% 异氟烷的氧气中。使用配备加热垫的麻醉装置，以防止小鼠体温过低。
2. 用一只手固定麻醉的小鼠，首先将 30 μL 髓鞘少突胶质细胞糖蛋白 （MOG） - 肽 aa_35-55 （MOG_35-55）/完全弗氏佐剂 （CFA） 乳剂皮下注射到靠近腹股沟淋巴结的后腿侧面（图 1:1 + 2;总共 60 μL;左侧 30 μL 和右侧 30 μL）靠近腹股沟淋巴结。
3. 将小鼠放在肚子上，将 20 μL 的 MOGaa_35-55/CFA 乳剂注入到小鼠尾根的左右软脂肪组织中（图 1:3 + 4;总共 40 μL;左侧尾根 20 μL 和右侧尾根 20 μL）和一小滴 MOGaa_35-55/CFA 乳剂进入小鼠的颈部（图 1: 5）.
4. 将 100 μL 百日咳毒素 （PTx） 溶液腹膜内注射到小鼠体内。将鼠标的头部保持在身体中心下方，以避免注射到肠道中。
5. 将维持日粮（挤出主要营养物质:粗蛋白 18.5%;粗脂肪 4.5%;粗纤维 4.5%;粗灰分 6.5%;淀粉 35%;代谢能:13.1 MJ/kg）替换为育种日粮（挤出主要营养物质:粗蛋白 23.5%;粗脂肪 5.5%;粗纤维 3%;粗灰分 5.7%;淀粉 36%;代谢能:14.3 MJ/kg），以便在预期的临床疾病之前和期间为小鼠提供能量含量更高的食物。
6. 取下面罩，用加热垫将鼠标转移到其家用笼子上。10 分钟后，确保鼠标完全清醒并可以活动。
7. 第一次治疗后 48 小时重复 PTx 注射（步骤 1.4）。

2. EAE 小鼠的评分

1. 每天早上通过查看笼子内部来检查 EAE 小鼠的健康状况。
2. 每天下午对 EAE 小鼠进行评分。
3. 将 EAE 实验中包含的每只小鼠从笼子中取出，并用手指向上移动尾巴，检查尾巴是否有张力。一只健康的老鼠会保持尾巴向上（尾巴有一个张力）。如果临床 EAE 已经开始，尾部张力会更低，从尾部逐渐下降可以看出。最终，老鼠将根本无法抬起它的尾巴。
4. 将 EAE 实验中包含的每只小鼠放在洁净工作台上，观察和记录行走行为。有关评估疾病严重程度（EAE 评分）的评分标准，请参见表 1。
5. 评估并记录实验中包括的每只小鼠的体重。
6. 为确保临床 EAE 评分为 1 的小鼠摄入足够的食物和水，在笼子底部的塑料盘中供应湿润的食物，并每天刷新。

Results

图 1:EAE 诱导进样部位的图形表示。1） 将 30 μL MOG 乳剂注入右侧，2） 将 30 μL MOG 乳剂注入左侧腹部的进样部位，3） 将 20 μL MOG 乳剂注入左尾根的进样部位，4） 将 30 μL MOG 乳剂注入右尾根的进样部位， 5） 将一小滴 MOG 乳剂注射到颈部。

表 1:评估 EAE 疾病严重程度的评分标准。

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Materials