使用溶血卵磷脂在视神经中诱导局部脱髓鞘

摘要

来源：You, Y. 等，实验性视神经脱髓鞘大鼠模型中的视觉诱发电位记录。J. Vis. Exp. (2015)

本视频演示了在麻醉动物中通过手术暴露视神经并精确递送溶血卵磷脂以诱导局灶性脱髓鞘的过程，从而为后续研究建立神经病理学条件。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 视神经注射

1. 通过腹腔注射氯胺酮（75 mg/kg）和美托咪啶（0.5 mg/kg）对动物进行麻醉。
   注意： 麻醉诱导后，观察动物的退缩反射（夹趾试验、角膜反射和眼睑反射等），若这些反射消失，则可作为开始手术的指征。手术过程中持续监测动物状态，若反射重新出现，应追加麻醉药物（每次追加初始氯胺酮剂量的10%）。实验中使用成年大鼠（>12周龄）。
2. 剃除手术区域的皮肤毛发。将动物置于加热垫（37 °C）上以维持术中体温。使用聚维酮碘对皮肤进行局部消毒。铺设手术巾。涂抹眼用软膏以防止全身麻醉期间角膜干燥。使用无菌器械以维持无菌操作环境。
3. 在随机选择的一侧眼球眶部上方皮肤做1至1.5 cm长的切口。使用精细虹膜剪刀分离皮下组织，暴露眶腔。在手术显微镜下切开结膜和前部滕囊膜。
4. 牵开眼外肌和眶内泪腺，暴露约3 mm长的视神经。使用眼科刀纵向切开视神经周围的硬脑膜和蛛网膜层。
5. 将玻璃移液管插入视神经，位置位于眼球后方2 mm处。玻璃微移液管连接至汉密尔顿注射器。
6. 缓慢向神经内注射1%溶血卵磷脂（0.4–1.0 µl，含0.02%伊文思蓝，该浓度对髓鞘化无影响），注射时间约为30秒。
7. 缝合皮肤切口。涂抹抗生素软膏以预防感染。对侧眼可用于电生理记录的内部对照。
8. 将动物置于加热垫上，使其从麻醉中恢复。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
氯胺酮 100 mg/ml (Ketamil)	Troy Laboratories	AC 116
美托咪啶 1 mg/ml (Domitor)	Pfizer	sc-204073
恒温毯系统	Harvard Apparatus	NC9203819
哈密尔顿注射器	Hamilton	87930
溶血磷脂酰胆碱	Sigma	L4129
伊文思蓝	Sigma	E2129