在大鼠模型中诱导面神经损伤

摘要

来源：Ali, S. A., 等. 在大鼠模型中进行面神经手术以研究轴突抑制与再生。J. Vis. Exp. (2020)

本视频演示了在大鼠模型上进行的外科手术方案，详细介绍了从麻醉准备到面神经损伤诱导的各个步骤。该方案在医学研究中对于研究神经再生和外科技术具有重要意义。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 麻醉与准备

1. 将动物放入麻醉室，通过1.8%异氟烷和0.9 L/min氧气诱导全身麻醉。
   1. 通过评估自主呼吸以及通过足趾夹捏观察动物的面部 grimace 反应来评估意识状态，以确认麻醉深度适当。
2. 双侧眼部涂抹眼用润滑剂，以防止角膜刺激或干燥。
3. 使用剃刀或电动剪毛器剃除手术部位的毛发。
   1. 此时建立大鼠的识别方法，可通过耳标或尾部标签/标记实现。
4. 沿动物背部皮下注射0.05 mg/kg的丁丙诺啡，以预防术后疼痛。

2. 手术入路与损伤模式

1. 将动物转移至手术台，并通过鼻罩持续供气。确保在动物身下放置加热垫，并覆盖于动物和无菌区域下方，以维持其体温。
2. 将灭菌纱布（卷起并用胶带固定）置于大鼠颈部作为颈垫；这有助于更好地暴露手术视野。请注意，动物的正确体位对于高效识别和分离神经至关重要。
3. 为动物面部皮肤进行术前准备。为确保消毒效果，使用氯己定或含碘溶液与70%乙醇交替对术区进行三次擦洗。
4. 如需要，可预先规划并标记手术切口。前后移动同侧耳部，以确定耳后皮肤的自然褶皱方向。
5. 使用锐利的虹膜剪或15号刀片，在耳后皱襞处做一4–5 mm的切口。此切口可在后续操作中根据需要扩大。
6. 钝性分离皮下浅筋膜层，并放置微型Weitlaner牵开器以增强暴露。注意该区域可能存在小口径血管；最好通过Weitlaner牵开器向上或向下牵拉以避开这些血管。
7. 识别前腹肌，该肌自下向上走行，止于颅底。
   1. 沿其止点处轻柔地分开肌腹，以显露前腹肌的肌腱。请注意，该肌腱呈薄膜状白色结构，从肌肉发出并牢固附着于颅底。
8. 在确认前腹肌及其肌腱后，调整Weitlaner牵开器，进一步牵拉肌腹。请注意，随后暴露的区域即为面神经主干所在的三维空间。
   注意：该区域上方及内侧由颅底界定，外侧为前腹肌，后内侧为耳道，下方则由颈部结构（包括颞浅动脉）构成边界。
9. 充分暴露后，识别面神经主干，其自茎乳孔处从颅底穿出，位于二腹肌肌腱下方并向下走行。请注意，该神经呈珍珠白色条索状，包埋于动物腮腺-咬肌筋膜内。在进一步暴露神经时需格外谨慎，原因如下：
   1. 避免剧烈解剖或垂直撑开，以防造成牵拉介导的神经失用性损伤。
   2. 避免向后内侧方向过度解剖，以防破坏覆盖耳道的薄层组织，从而导致中耳菌群进入手术区域。
   3. 避免因广泛向内下方解剖而损伤颞浅动脉。请注意，若发生损伤，将表现为快速、搏动性出血。
      1. 若动脉受损，应立即使用镊子夹持棉签或无菌纱布施加压迫止血。可局部使用止血剂或液体纤维蛋白胶。需注意，动物可能需要皮下注射0.9%无菌生理盐水以维持液体平衡。
10. 沿神经向下（远端）方向解剖，追踪面神经主干自茎乳孔出口后的远端走行。
    1. 延长原始切口，以充分暴露神经及其分支。注意避免破坏腮腺，以免术后形成涎腺囊肿（sialocele）。
11. 按以下方法诱导所需的损伤模式：
    1. 对于压榨伤，使用表面光滑的钟表匠镊牢固夹住神经并进行压迫9。持续施加稳定且可重复的压力30秒，以确保形成适当的压榨损伤。
    2. 对于单纯横断伤，用细齿镊夹住覆盖在神经上的筋膜或邻近的外膜，使用锐利的显微剪在目标位置单次切割，干净利落地横断神经。操作时注意避免镊子对神经施加过度牵拉。
    3. 对于神经缺损模型，采用与单纯横断伤类似的方法创建所需神经缺损。术中可使用已灭菌的棉签杆，按所需神经缺损长度预先截断，以确保各动物间损伤模式的一致性。

3. 伤口闭合

1. 用无菌生理盐水冲洗伤口，并用无菌纱布擦干。
2. 使用可吸收缝线以简单的皮下缝合方式对合皮肤边缘，或使用皮肤胶或伤口夹闭合伤口，这些方法均可接受。缝合埋线时，先从一侧皮肤边缘由深至浅进针，再从对侧皮肤边缘由浅至深进针。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1.8% 异氟烷	VetOne	13985-030-40
11-0 尼龙显微缝合线	AROSuture	TK-117038
4-0 单丝聚乙醇酸缝合线	VWR	75982-084
缓释布托啡诺	ZooPharm	MIF 900-006
卡洛芬	Sigma-Aldrich	MFCD00079028
氯己定	VWR	IC19135805
珠宝镊	VWR	21909-458
微型韦特兰纳牵开器	VWR	82030-146
显微剪刀	VWR	100492-348
微型肌腱切断剪刀	VWR	89023-522
15号手术刀片	VWR	102097-834
手术显微镜	Leica
凡士林眼用凝胶	Pharmaderm	B002LUWBEK
无菌水	VWR	89125-834
组织粘合剂	Vetbond, 3M	NC9259532
水导垫	Aqua Relief System	ARS2000B