使用撞击探针建立小鼠创伤性脑损伤模型

摘要

来源：Furmanski, O., 等. 小鼠脑损伤的可控皮层撞击模型及人诱导多能干细胞衍生神经细胞的治疗性移植。J. Vis. Exp. (2019)。

本视频演示了通过开颅方式在小鼠中诱导创伤性脑损伤的操作步骤：沿颅骨中线做切口，钻透颅骨并移除骨瓣以暴露脑皮层，施加高压以造成损伤。随后缝合伤口，制备可用于后续实验的小鼠模型。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 开颅术与控制性皮质冲击

1. 准备可控皮层撞击装置和手术用品。
   1. 用1 mL无菌生理盐水填充一支滑动式针筒，体积为0.5 mL，用于伤口冲洗。在针筒上安装25 G针头以控制冲洗过程。
   2. 将环孢素A（CsA）溶于二甲基亚砜（DMSO）中，配制成终浓度为1 mg/mL的稀释溶液。用另一支1 mL滑动式针筒吸取0.5 mL CsA溶液，用于免疫抑制。在CsA针筒上安装25 G或更大规格的针头。
   3. 将可控皮层撞击活塞连接至立体定位仪的臂上，并将其设置为15°角。将一个直径为3 mm的撞击探针连接至活塞上。
   4. 将撞击速度设定为1.5 m/s，撞击停留时间设定为0.1 s，以产生轻度皮层损伤。
2. 进行单侧开颅术
   1. 将小鼠放入与异氟烷蒸发器相连的麻醉诱导室中，氧气源为压缩氧气。使用约3%异氟烷和约0.7 L/min氧气进行麻醉诱导。通过脚趾夹捏无反应来判断麻醉深度。
   2. 使用电动剪刀剃除头皮毛发，并用棉签清除松散的毛发。
   3. 将小鼠固定于配备麻醉气体输送鼻罩的立体定位仪上。
      1. 在立体定位仪上放置一个37 °C加热垫，置于小鼠下方，以....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
1 ml 注射器	Becton Dickinson (BD)	309659
25G Precision Glide 注射器针头	Becton Dickinson (BD)	305122
麻醉蒸发器	Vetland	0521-11-22
动物操作布			从百货商店购买
Betadine	Purdue Products	NDC-67618-151-32
压缩氧气			根据地区选择合适产品
环孢素 A	Sigma-Aldrich	30024-100mg
二甲基亚砜（DMSO）	Sigma-Aldrich	D8418-500ml
DMEM	Invitrogen (ThermoFisher)	A14430-01
精细镊子	Fine Science Tools	11254-20
镊子	Fine Science Tools	91106-12
高速旋转微型电机套件	Foredom Electric Co.	K.1070 - K.107018
理想型微型钻头套装（5件）	Cell Point Scientific	60-1000
CCI 用 Impact One 立体定位撞击器	Leica Biosystems	39463920
眼科软膏	Falcon Pharmaceuticals	NDC-61314-631-36
小型啮齿类动物立体定位仪	Stoelting	51925
小型剪刀	Fine Science Tools	14060-09
无菌酒精棉片	Fisherbrand	06-669-62
无菌棉签/Kendall Q-tips	Tyco Healthcare	540500
无菌生理盐水	Hospira	NDC-0409-1966-07
缝合线 — 5.0 丝线带弯曲针	Oasis	MV-682