在大鼠模型中建立活性HIV感染

摘要

来源：Li, H., McLaurin, 等 一种EcoHIV脑感染的大鼠模型。J. Vis. Exp. (2021)。

本视频演示了将嵌合型HIV病毒注射到大鼠脑皮层的操作步骤，其中病毒RNA会整合到宿主基因组中，进行复制并扩散，从而在实验模型中建立活跃的HIV感染。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. EcoHIV-EGFP [嗜神经性HIV增强型绿色荧光蛋白] 病毒立体定位手术

1. 使用3%七氟烷麻醉大鼠。当大鼠对有害刺激无反应且反射消失时，进行步骤1.2。
2. 剃除脑区毛发，并用70%乙醇和含氯己定的消毒液对皮肤进行两次消毒。将大鼠俯卧位固定于立体定位仪中。
3. 沿头皮正中线做皮肤切口（5–6 cm）。
4. 在前囟外侧0.8 mm、头侧1.2 mm处标记两个钻孔位置。在颅骨相应位置各钻一个直径为0.4 mm的孔。
5. 将滴定浓度的EcoHIV慢病毒溶液（1.04 × 10⁶ TU/mL）吸入10 µL注射器中。将注射器固定于立体定位仪上。
6. 将针头下降至接近钻孔表面的位置，测量并继续下插2.5 mm深度。
7. 以0.2 µL/min的速度注入1 µL病毒溶液。注毕后保持针头在注射部位内5分钟。随后缓慢上提针头，直至完全退出大鼠颅骨。
8. 用4-0丝线缝合皮肤。
9. 用70%乙醇对切口消毒一次。皮下注射布托啡诺（Dorolex，0.1 mg/kg体重）。
10. 将大鼠转移至带有加热垫的恢复室，直至其苏醒。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
抗生素-抗真菌溶液	Cellgro	30004CI	100X
盖玻片	VWR	637-137
钻孔机
Ethicon Vicryl Plus 抗菌性 4-0 聚乳酸-羟基乙酸共聚物 910 缝合线，27 英寸，FS-2	Med Vet International	VCP422H
哈密尔顿注射器	Hamilton	1701
虹膜镊	World Precision Instruments	15914
虹膜剪刀	World Precision Instruments	500216
立体定位仪	Kopf Instruments	Model 900
Vannas 剪刀	World Precision Instruments	500086