使用电刺激在大鼠模型中诱导急性 Pons 梗死

Abstract

来源:Luo， M. et al.通过电刺激建立大鼠急性脑桥梗死。J. Vis. Exp.（2020 年）

该视频演示了一种使用电刺激在麻醉大鼠脑桥中诱导组织损伤或梗塞的程序。

Protocol

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 脑桥梗死的建立

1. 麻醉前立即预热加热垫。
2. 将颅骨钻头连接到立体定位框架上的支架上。
腹
3. 膜内注射大鼠 50 mg/kg 氯胺酮和 5 mg/kg 甲苯噻嗪。检查是否缺乏 toe-pinch 反应。
4. 将大鼠以俯卧位安装在立体定位框架上。将耳杆放在耳道上方以固定头部。确保颅骨保持水平，以避免注射液歪斜。
5. 通过立体定位鼻锥附件通过异氟醚（100% 氧气，2.5% 异氟醚）维持麻醉，用于具有入口和出口的大鼠。使用加热垫将温度保持在 37 °C，并在整个过程中对其进行监测。
6. 使用眼药膏防止角膜干燥。用镊子捏住爪子，确保没有轻微的疼痛反应。
7. 用微型剃须刀剃掉头骨的毛发。从手术切口部位开始循环涂抹洗必泰手术擦洗液并向外旋转。
8. 用手术刀从双侧外眦线到后囟后 0.5 cm 处做一个 3 cm 的中线切口，手术记号笔应标记。
9. 使用棉签去除血液。
10. 应在皮瓣的每一侧放置一块手术胶带以露出头皮（图1）。
11. 用蘸有 0.9% NaCl 的棉签轻轻去除颅骨上的结缔组织。如果不去除，结缔组织将被钻头夹住。
12. 识别前囟。选择前囟的中心点作为原点，并使用细尖黑色手术记号笔进行标记。
13. 将钻头放在 6.0 mm AP、2.0 mm ML（范围为 0.5-3.0 mm，图 2A）。
14. 使用自动钻头进行开颅手术（直径 1 毫米）。小心作，因为该点靠近静脉窦。
15. 从立体定位框架上拆下钻头。
16. 将带有绝缘护套的 22 G 探头放置在立体定位框架中（图 3A）。探针尖端应放置在护套近端上方 2 mm 处（图 3A、B;图 2B）。
17. 确保护套进入大脑 7 毫米（7 毫米 DV，图 2B;图 1C）。
18. 沿鞘推进探针（图 1D），直到探针尖端低于大脑表面 9 毫米（图 2D）。
19. 将电极连接到电刺激器（图 3C）。将阳极连接到探头，如图 1D 所示。将阴极连接到大鼠（通常连接到大鼠的耳朵）。
20. 打开电刺激器并设置以下参数:单脉冲宽度 = 4,050 ms;电压 = 50 V;电流 = 4 mA（图 3C）。在电刺激期间，大鼠会表现出颤抖。在这项研究中，用于行为测试、MRI 和 TTC 的对照组大鼠未打开该设备。
21. 刺激后将探头留在原位 5 分钟。
22. 从大脑中取出探针（图 1F）。
23. 使用骨水泥覆盖开颅手术。缝合伤口前让水泥干燥。
24. 用 4-0 聚酰胺缝合丝缝合伤口。缝合三到四次后，打 2-1-1 个标准手术结。
腹
25. 膜内注射青霉素（0.25 mL，80 IU 在 4 mL 生理盐水中稀释）以防止感染。
以
26. 2 mg/kg 的剂量皮下注射美洛昔康给大鼠，然后每 24 小时重复一次。
27. 每 15 分钟监测一次大鼠，直到完全清醒，然后用加热垫将它们放回笼子中。在祭祀前免费提供食物和水。
    注意: 所有手术都应遵循无菌手术原则。手术前，在手术擦洗双手后，穿上磨砂膏、外科口罩和无菌手套。始终将无菌缝合材料保持在无菌区域内。

Results

图 1:梗塞的建立。（A） 在头骨上打一个洞。（B） 将护套移至孔中。（C） 注射护套。（D） 探针的注射。（E） 阳极（红色箭头）已连接。（F） 探头被移除。（G） 大脑表面留下的孔（红色箭头）。

图 2:探头的位置。（A） 立体定位位置的示意图:箭...

Materials