人脑皮层切片中β-淀粉样肽的可视化

摘要

来源：Ikegawa, M. 等. 利用基质辅助激光解吸/电离成像质谱法对人脑中β-淀粉样蛋白沉积进行可视化观察. J. Vis. Exp. (2019)

该视频演示了从阿尔茨海默病患者脑组织中制备人类大脑皮层切片的实验流程，用于通过基质辅助激光解吸/电离成像质谱技术（MALDI-IMS）分析β-淀粉样蛋白（Aβ）肽的沉积情况。实验步骤包括载玻片的准备、对组织进行处理以增强离子化效率，以及分析β-淀粉样蛋白肽的空间分布。

方案

所有涉及样本采集的程序均按照本机构的IRB指南进行。 

1. 成像质谱（IMS）组织切片的制备

1. 人尸体脑组织标本的处理
   注意：确保质谱成像（IMS）的样本制备步骤能够保持组织的原始状态。避免污染和死后变化。以下步骤至关重要。
   1. 从死后8小时内取出、处理并储存在-80 °C的脑组织中获取用于质谱成像（IMS）的人类皮层标本。采集阿尔茨海默病（AD）患者及年龄匹配对照者的枕叶皮层脑组织标本。​
2. 冷冻组织切片的制备
   1. 在冷冻切片机上切割组织切片。将导电的氧化铟锡（ITO）涂层载玻片放入冷冻切片机内。
   2. 在冷冻切片机内将-80 °C保存的尸体脑组织升温至-22 °C。
   3. 每次实验均使用新的 disposable 刀片，并始终尽量使用刀片的清洁部分。
   4. 将冷冻的尸体脑组织连同少量最佳切割温度（OCT）包埋剂（足以覆盖切片台中央区域；见 材料表）一起放置于切片台上。
   5. 选择合适的薄切条件。对于质谱成像（IMS），人脑组织切片厚度应为10–12 μm。....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
冷冻切片机	Leica Microsystems, Wetzlar, Germany	CM1950
氧化铟锡（ITO）涂层显微镜载玻片	Bruker Daltonics	#237001
刀片（一次性）	Leica Microsystems, Wetzlar, Germany	#117394
O.C.T. 包埋剂	Leica Microsystems, Wetzlar, Germany	FSC 22 Blue
扫描仪	EPSON	GT-980
喷笔	GSI Creos	PS274
压缩机	MRHOBBY	Mr.Linear compressor L5
超声波喷涂仪	Bruker Daltonics	ImagePrep
自动喷涂仪	HTX Technologies	TM Sprayer
共聚焦激光扫描显微镜	Carl Zeiss Inc.	LSM 700
超高速 MALDI 仪器	Bruker Daltonics	rapifleX MALDI Tissuetyper
MALDI 控制软件	Bruker Daltonics	FlexControl 3.8
分子组织学软件	SCiLS, Bremen, Germany	SciLS Lab 2016a
芥子酸（SA）	Nacalai tesque	30494-91
α-氰基-4-羟基肉桂酸（CHCA）	Wako	037-19261
校准标准品	Bruker Daltonics