一种人诱导多能干细胞来源神经元的体外拉伸损伤模型

摘要

来源：Phillips, J. K. 等. 在96孔板中对人诱导多能干细胞来源的神经元进行高速拉伸损伤的方法. J. Vis. Exp. (2018)

本视频展示了在人诱导性多能干细胞来源的神经元（hiPSCNs）上诱导拉伸损伤的过程。将细胞接种于底部无底的多孔板中，该板带有附着的硅胶膜。通过对膜施加可控的机械应力，引起细胞骨架破坏和细胞膜损伤，从而在细胞中诱导出拉伸损伤表型。

方案

1. 培养板制备

1. 用200 W等离子清洗仪对96孔板盖进行等离子处理（参见材料表）在高功率下处理60秒，将芯片底部朝上放入等离子清洗仪中。通过腔室窗口观察是否有紫色辉光出现，该现象表明已形成有效的等离子体。此键合技术改编自Sunkara等人的研究。
2. 60 秒内将培养皿盖倒置（底部朝下）放入 200 mL 去离子水（DI 水）中，其中含有 1.5% 的 (3-氨基丙基)三乙氧基硅烷（APTES），浸泡 20 分钟。该溶液不稳定：应在放入培养皿前不超过 60 秒内配制。
   警告： 在通风橱中操作 APTES。
3. 等离子体处理 在等离子清洗仪中以高功率对提取的硅胶膜进行60秒的等离子体处理。控制等离子体处理时间，使其结束时间不早于1.2步骤中20分钟周期结束前5分钟以上。
4. 使用镊子将经等离子体处理的膜置于 7.5 × 11 cm 的² 羊皮纸矩形。将一块7.5 cm × 11 cm × 0.5 cm的铝板对齐放置于平板制备夹具的下部。用镊子将硅胶膜和羊皮纸在铝板上对齐放置。
5. 从APTES溶液中取出板盖，甩去多余溶液。浸入200 mL去离子水浴中5秒，甩去多余水分。再浸入另一份200 mL去离子水浴中5秒，甩去多余水分。在浸入下一块板盖前，更换上述水浴中的去离子水。
6. 使用压缩空气将板的....

结果

图1：损伤装置的标注示意图。（A）顶视图，（B）等距视图，（C）前视图，（D）右侧视图。比例尺适用于正交视图（A、B 和 D）。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
.010" 硅胶片	Specialty Manufacturing, Inc	#70P001200010	聚二甲基硅氧烷 (PDMS) 片
Sparkleen	Fisher Scientific	#043204
Nunc 256665	Fisher Scientific	#12-565-600	无底96孔板
Kim Wipes	ULINE	S-8115
等离子清洗机	Harrick Plasma	#PDC-001-HC
(3-氨基丙基)三乙氧基硅烷	Sigma-Aldrich	#440140	APTES
烘焙纸	Reynolds	N/A
圆顶灯	CCS inc	LFX2-100SW
圆顶灯电源	CCS inc	PSB-1024VB
轴向漫射照明单元	Siemens	Nerlite DOAL-75-LED	漫射轴向光源
高功率LED阵列	CREE	XLamp CXA2540	高功率LED阵列
LED支架	Molex	1807200001	LED支架
LED电源	Mean Well	HLG-320H-36B	恒流电源
FastCam Viewer软件	Photron		相机软件
Fastcam Mini UX50	Photron	N/A	高速相机
Micro-NIKKOR 105mm f/2.8	Nikon	#1455	高速相机镜头
0.1 mg/mL 聚-L-鸟氨酸	Sigma-Aldrich	#P4597
iCells	Cellular Dynamics International	#NRC-100-010-001
iCell 培养基	Cellular Dynamics International	#NRM-100-121-001
iCell 添加剂	Cellular Dynamics International	#NRM-100-031-001
层粘连蛋白	Sigma-Aldrich	#L2020
音圈驱动器	BEI Kimco	LA43-67-000A
光学线性编码器	Renishaw	T1031-30A
伺服驱动器	Copley Controls	Xenus XTL
控制器	National Instruments	cRIO 9024 实时PowerPC控制器
cRIO 机箱	National Instruments	cRIO 9113
数字输入模块	National Instruments	NI 9411
数据采集机箱	National Instruments	NI 9113
LabVIEW	National Instruments
hiPSCNs	Cellular Dynamics International