使用树脂毒素建立小纤维神经病小鼠模型

摘要

来源：Lee, Y. 等，利用瞬时受体电位香草素受体1型超强激动剂建立纯小纤维神经病变小鼠模型 J. Vis. Exp. (2018)。

本视频演示了一种利用TRPV1激动剂树脂毒素（resiniferatoxin, RTX）在小鼠中建立小纤维神经病模型的方法。该方法详细介绍了向小鼠给予RTX的操作步骤，并阐述了RTX如何诱导小直径感觉神经元发生神经元死亡，从而建立神经病理性模型。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 树脂毒素（RTX）神经病变的建立

注意： RTX 具有神经毒性且属于危险物质。接触后会对眼睛、黏膜和上呼吸道产生刺激作用。配制 RTX 时应避免吸入，并佩戴实验室护目镜和实验服。若皮肤接触或操作后，应立即用大量清水冲洗。

1. 将1 mg RTX粉末加入200 µL的Tween 80与无水乙醇等体积混合液中（每种溶剂各100 µL）。
2. 将RTX溶液分装（每管12 µL），于-20 °C保存，有效期最长为3个月。此为RTX储备液；超过有效期后应丢弃剩余的RTX溶液。
3. 用生理盐水将RTX储备液稀释至终体积600 µL。RTX溶液的终浓度应为0.01%，相当于每10 µL载体溶液中含有1 µg RTX。
4. 选用8周龄成年雄性ICR小鼠（35–40 g）作为实验动物，使用微量注射器经腹腔注射（i.p.）给予单次剂量的RTX溶液（剂量分别为200、50和10 µg/kg）。 小鼠通过吸入5%异氟烷进行深度麻醉。若在注射RTX过程中小鼠出现四肢回缩反应，应延长麻醉吸入时间。
   示例：若小鼠体重为40 g，则需注射20 µL RTX溶液，对应剂量为50 µg/kg。
5. 另设一组小鼠，给予等体积的载体溶液（生理盐水中含10% Tween 80和10%无水乙醇）作为对照。
6. RTX注射后，将小鼠放回塑料笼中，维持12小时光照/12小时黑暗的循环环境，并自由提供食物和水 ad libitum。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
化学试剂
树脂毒素	Sigma	R8756
吐温80	Sigma	P1754