使用 Resiniferatoxin 建立小纤维神经病变小鼠模型

摘要

来源:Lee， Y. et al.， 建立具有瞬时受体电位香草酸样蛋白 1 型超强激动剂的纯小纤维神经病变小鼠模型。J. Vis. Exp.（2018 年）。

该视频演示了一种使用 TRPV1 激动剂树脂毒素 （RTX） 在小鼠中建立小纤维神经病变模型的方法。它概述了对小鼠施用 RTX 所涉及的步骤，并解释了 RTX 如何在小直径感觉神经元中诱导神经元死亡，从而建立神经病变模型。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 树脂毒素 （RTX） 神经病变的建立

注意:RTX 具有神经毒性和危险性。接触时，它对眼睛、粘膜和上呼吸道有刺激物作用。在 RTX 制备过程中避免吸入并佩戴实验室眼镜和外套。如果皮肤接触或处理后，请用大量清水冲洗。

1. 将 1 mg RTX 粉末加入等体积 Tween 80 和无水乙醇（每种溶剂 100 μL）的 200 μL 混合物中。
2. 分装 RTX 溶液（12 μL/小瓶）并在 -20 °C 下储存长达 3 个月。这构成了 RTX 股票;到期时丢弃剩余的 RTX 解决方案。
3. 用生理盐水稀释 RTX 原液至最终体积为 600 μL。RTX 溶液的最终浓度应为 0.01%，相当于 10 μL 载体溶液中的 1 μg RTX。
4. 使用 8 周龄成年雄性 ICR 小鼠 （35-40 g） 作为实验动物，用显微注射注射器腹膜内 （ip） 给予单剂量的 RTX 溶液 （剂量: 分别为 200、50 和 10 μg/kg）给小鼠。用含有 5% 异氟醚的吸入器麻醉小鼠进行深度麻醉。如果小鼠在 RTX 注射过程中表现出四肢的撤退作用，则小鼠应服用更长的麻醉吸入时间。
   示例:如果鼠标重 40 g，那么它将接受 20 μL 的 RTX 溶液，相当于 50 μg/kg 的剂量。
5. 给一组小鼠等体积的载体（10% Tween 80 和 10% 无水乙醇在盐水溶液中）作为对照。
6. RTX 注射后，在 12 小时光照/12 小时黑暗循环中将小鼠放回塑料笼中，并随意提供食物和水。

材料