一种在Drosophila果蝇中诱导闭合性头部创伤性脑损伤的技术

摘要

来源：Sun, M., 等 一种模拟慢性创伤性脑病的新方法 黑腹果蝇. 视频实验杂志 (2017).

本视频演示了一种使用气体驱动撞击装置对麻醉的黑腹果蝇（Drosophila）造成闭合性头部创伤性损伤的操作步骤。该损伤会影响神经元功能，并损害果蝇的行走能力。

方案

1. 攻击装置的组装（图1）

1. 从1 mL结核菌素注射器中取出活塞。在注射器管身的1 mL刻度处剪断。
2. 从200 µL移液枪头上去除一个气溶胶屏障（3 mm高度 × 4 mm直径），并将其用作撞击器。将撞击器放入注射器筒体内，轻轻敲击筒体，使撞击器移至尖端，平面一侧覆盖喷嘴开口。
3. 将管筒尖端连接至与二氧化碳（CO₂）气源相连的塑料管₂流量调节器 果蝇 麻醉工作站
4. 将桶身垂直放置，并用标准夹具固定在支架上，确保撞击器位于桶的底部。
5. 改造一个 200 µL 移液器吸头以制作果蝇固定器。
   1. 从尖端切去4 mm，形成一个直径为0.8 mm的开口，仅使果蝇头部露出。
      ​注意： 果蝇的胸部及其他所有身体部位将留在移液器吸头内部。
6. 改造一个1,000 µL移液器吸头和一个1 mL注射器针头帽以制备连接器。
   1. 从吸头开口端截取44毫米。取一段6毫米长的1毫升注射器针头帽，紧密插入1,000 µL移液器吸头的剩余部分中。

2. 击打装置的操作

1. 在果蝇垫上使用 CO₂ 麻醉一只2日龄的成年雌性果蝇。
2. 用细毛刷轻轻将其转移至果蝇固定器中。轻敲固定器，使果蝇头部从末端露出。如果果蝇的喙部伸出固定器末端外，用钝化的1 mL注射器针头轻轻将其推回固定器内。
   注意：务必确保果蝇的喙部保持在固定器内部，否则果蝇可能因喙部吸吮性损伤而死亡。
3. 使用连接器将果蝇固定器紧固在注射器筒上，使果蝇头部朝下。
4. 将气体压力设定为 100 kPa，并根据实验设计调整流速。
5. 快速打开并关闭流量调节拨动开关，使撞击装置对果蝇头部撞击一次。
6. 提起果蝇固定器并移至果蝇垫上方。将固定器翻转，轻敲侧面使果蝇脱出。将果蝇放入空的收集管中恢复。

结果

图1. 打击装置示意图。 该设备使用了在实验室中易于获取的材料 果蝇 实验室：1) 200 µL移液器吸头，2) 1 mL结核菌素注射器，3) 冲击器，4) 连接管，连接至一个 果蝇 麻醉工作站，以及5）用于将针头固定在注射器上的连接器。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
气溶胶屏障	USA Scientific	1120-8810	用作撞击器
200 µl 移液器吸头	USA Scientific	1111-0706	用作果蝇头部固定装置
1000 µl 移液器吸头	USA Scientific	1122-1830	用作连接器
1 ml 结核菌素注射器	Becton Dickinson	309625
60 mm 培养皿	Fisher Scientific	FB0875713A	用作行为追踪区域
流量调节器	Genesee Scientific	59-122WC
标准夹持器/支架	EISCO Scientific	CH0688
细毛刷	Genesee Scientific	59-204
果蝇操作垫	Genesee Scientific	59-114