建立新生小鼠缺氧缺血性脑损伤模型

摘要

来源：Kim, M., 等 新生小鼠缺氧缺血性脑损伤模型中的神经行为学评估。J. Vis. Exp. (2017)。

该视频演示了建立小鼠模型以研究新生儿缺氧缺血性脑损伤的操作流程。视频概述了通过手术诱导缺血，并使动物暴露于低氧环境以加重脑损伤的各个步骤。最后，展示了如何评估所形成的脑部病变，确保该小鼠模型可用于后续科学研究。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 新生儿缺氧缺血性脑损伤的小鼠模型

1. 使用异氟烷麻醉幼鼠。
   1. 将幼鼠（少于5只）放入麻醉箱中，并盖上盖子。
   2. 开启麻醉系统约15分钟；使用台式麻醉机调节气体和异氟烷。将氧气流量计调节至1.5 L/min，异氟烷蒸发器调节至3-5%，以诱导麻醉。
   3. 15分钟后，将异氟烷蒸发器调节至1-2%，以维持麻醉状态。
2. 将完全麻醉的幼鼠置于解剖显微镜下（腹部朝向操作者），并用胶带固定。
3. 使用灭菌剪刀在颈部做约0.7 mm的切口。
4. 使用灭菌镊子小心去除脂肪组织，暴露单侧右侧颈动脉。
5. 用5-0可吸收缝线结扎单侧右侧颈动脉。
6. 用5-0缝线缝合颈部切口。
7. 将每只幼鼠放入37 °C的温控低氧舱中1小时以恢复。不要关闭舱盖。
8. 手术后1小时，当幼鼠完全清醒后，关闭低氧舱盖，并降低气体浓度以建立低氧条件（8% O₂ 和 92% N₂）。
9. 低氧处理90分钟后，将幼鼠放回笼中。
10. 在脑缺血损伤一周后，重复步骤1。
    1. 麻醉后，使用灭菌剪刀和镊子在头皮上做切口，以观察右侧半球后外侧区域的脑损伤。
       注意：该处理可诱导幼鼠产生低氧。所有小鼠脑损伤的存在与否及其程度可通过半透明颅骨肉眼观察评估。根据变色区域（即脑损伤）的大小或体积，将幼鼠分组。若无可见皮质损伤，则归为“无皮质损伤”组；若存在可见皮质损伤（即右侧半球出现病灶），则归为“皮质损伤”组。由于分组是在手术后一周进行，因此在处死时若脑组织形态学特征更明确，可对分组进行调整。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
缺氧培养箱	Jeung Do Bio & Plant Co	Experimental Builder
哈佛仪器 Fluovac 麻醉系统	Harvard Apparatus
麻醉箱			丙烯酸树脂箱
I-Fran 液体（异氟烷）	Hana Pharm. Co., Ltd.		全身麻醉药（异氟烷 100 ml）
CD-1 小鼠	Orient Co., Ltd.
蓝色尼龙单丝不可吸收缝线 5-0 50 cm	Ailee Co., Ltd.	NB 521