使用离子选择性和离子电渗疗法微电极表征脑切片中的细胞外间隙

Abstract

来源:Odackal， J. 等人。 用四甲基铵进行实时离子电渗疗法，以量化大脑细胞外间隙的体积分数和曲折度。J. Vis. Exp.（2017 年）

该视频演示了如何通过使用离子选择性和离子电渗疗法微电极来测量和比较电信号，从而表征脑切片中的细胞外空间。这个过程有助于确定空间的体积分数和扭曲程度。

Protocol

所有涉及动物样本的程序均已由适当的动物伦理审查委员会审查和批准。

1. 脑切片中的实时离子电渗疗法

1. 将 400 μm 厚的脑切片放入记录室中，确保其完全浸没在流动的人工脑脊液 （ACSF） 中。使用水彩画笔定位切片，并用网格轻轻固定。
2. 将离子电渗疗法微电极和 ISM 移动到脑切片上感兴趣区域的上方。浸入流动的 ACSF 中，但浸入切片上方。
3. 将参比通道和离子传感通道的电压偏移到"0" mV。等待两个通道中的电压稳定下来。在图表记录仪上，标记在 ISM 的离子传感通道上测得的电压。使用此选项可计算 Wanda 中的基线 V 参数。
4. 将 ISM 和离子电渗疗法微电极放置在切片中 200 μm 深处，彼此相距 120 μm。将微电极移动到脑切片后等待信号稳定。
   注意: 施加到离子电渗疗法微电极的偏置电流导致四甲基铵 （TMA） 的少量积累。过早进行录音并低估信号积累是一个常见的错误。
5. 在图表记录仪上，标记在 ISM 离子感应通道的脑切片中测得的稳定电压。计算步骤 8.3 和步骤 8.4 中测得的 TMA 信号之间的电压差，并将该值输入到 Wanda GUI 的测量电极框中的"基线 V （mV）"字段中。
6. 在 GUI 的左侧，确保正确记录/输入所有实验参数。将"培养基"设置为"大脑"，将"传输数"设置为步骤 7.4 中为离子电渗疗法微电极计算的平均值，将"温度"设置为包含切片的浴液的温度><。 注意: 必须为每组测量值记录 V。基线 V 将被 Wanda 转换为基线 C （mM） 参数（即脑组织中 TMA 的浓度）。
7. 单击"获取"开始录制，并允许它进行完整录制。等到 TMA 信号返回到基线，然后再获取新的记录。
8. 在从选定的大脑位置移除微电极之前，请连续记录两到三次。在每次记录之前将测得的温度输入到 Wanda 软件中。
9. 将两个微电极对角线移回切片表面。将两者升高到切片上方至少 50 μm。使用图表记录器，确定现在测得的 V 与步骤 8.3 中的测量值之间的任何变化。
10. 将 ISM 和离子电渗微电极的尖端在 x、y 和 z 轴上相对居中。从显微纵器控制框的显示中获取间距更改 （如果有）。

Materials