建立中枢神经系统感染的小鼠模型

摘要

来源：Shen, T.，等。登革病毒诱导的小鼠急性病毒性脑炎样疾病模型。J. Vis. Exp. (2019)

本视频展示了构建中枢神经系统感染小鼠模型的方法。通过颅内和腹腔联合注射，将病毒接种于 suckling 小鼠体内。病毒扩散后感染中枢神经系统，导致神经元细胞死亡和炎症反应。随着疾病进展，对小鼠进行感染症状的评估。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 感染操作步骤

1. 制备非适应性登革病毒2型（DENV2，PL046株）毒株储备液9（最初来源于中国台湾疾病控制中心，滴度范围为2.5 × 10⁷ 至 1 × 10⁹ PFU/mL）。
2. 用RPMI 1640（Roswell Park Memorial Institute 1640）培养基将病毒储备液稀释至1 × 10⁶ PFU，总体积为40 μL。
3. 取一支0.3 mL、配备30 G针头的注射器，吸入10 μL稀释后的病毒液（含2.5 × 10⁵ PFU）；另取一支相同规格的注射器，吸入30 μL稀释后的病毒液（含7.5 × 10⁵ PFU）。
4. 固定7日龄ICR（Institute of Cancer Research）乳鼠，并执行以下操作：
   1. 进行颅内注射时，用食指和拇指夹住乳鼠耳廓，使其呈俯卧位，将10 μL稀释病毒液注射至人字缝与矢状缝交点处的λ区。
   2. 完成颅内注射后，用食指和拇指固定乳鼠，使其呈仰卧位，随后将30 μL稀释病毒液轻轻注入腹腔。
      注意：为防止母鼠食仔，可使用75%酒精暂时消除母鼠的嗅觉感知。此外，建议用母鼠的粪便和尿液覆盖仔鼠。
5. 将乳鼠放回笼中，静置5分钟，观察其活动状态，包括行走能力及吸吮母乳情况，以评估操作后的安全性。
   注意：大多数情况下，乳鼠在操作后活动正常，未见明显不良反应或技术操作所致的有害影响。
6. 每日监测乳鼠的体重变化（使用微克天平测定）、急性病毒性脑炎样疾病进展（按第2节所述方法进行疾病评分）以及存活率。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
罗斯威尔公园纪念研究所1640培养基（RPMI）	Gibco	11875-085	稀释病毒
0.3 mL胰岛素注射器	BD Ultra-Fine­II	328838	脑内和腹腔注射
微量天平	METTLER TOLEDO's LabX	AL104	称量小鼠体重
未适应的DENV2（PL046株）	中国台湾疾病控制中心	-	感染小鼠
ICR乳鼠	BioLASCO 中国台湾有限公司	-	我们的小鼠模型