在小鼠模型中诱导病毒性神经炎症

摘要

来源：Laval, K. 等. 研究病毒诱导神经炎症反应的小鼠足垫接种模型。J. Vis. Exp. (2020)。

本视频展示了在小鼠模型中诱导神经炎症的过程。取一只已麻醉并制造微小伤口的小鼠，将伪狂犬病病毒（PRV）接种于伤口处。病毒侵染外周神经，扩散至背根神经节（DRG），并进一步侵染脊髓和脑组织。神经系统中神经元的感染引发免疫反应，导致神经元损伤，从而诱发神经炎症。

方案

所有涉及动物模型的操作均已被当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 小鼠足垫擦伤

1. 使用异氟烷气体麻醉剂（通过小型麻醉机以3%的剂量输送），对一只5–7周龄的C57BL/6小鼠进行麻醉。
   1. 在接种前，将小鼠仰卧位置于手术麻醉平面，并在其后足垫处进行操作。将带有隔膜（切口大小足以容纳动物口鼻）的鼻罩连接至小鼠，并以1.5%–2.0%的恒定剂量持续输送异氟烷气体麻醉剂。
   2. 使用镊子用力夹捏脚趾产生疼痛刺激，密切监测小鼠是否出现反应。
2. 用平头镊子轻轻夹住一只后足垫。
   1. 在足跟与行走垫之间的后足垫无毛皮肤区域，使用砂板（粒度100–180）轻轻摩擦约20次。避免因摩擦过于频繁或施加压力过大而导致出血。
   2. 使用精细镊子缓慢剥离因摩擦而松动的角质层，以暴露基底层。

2. 伪狂犬病病毒足垫接种

1. 在含有2%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素的DMEM培养基中，将病毒接种物稀释至所需滴度材料表).
   1. 在PK15细胞上定量病毒储备液中的空斑形成单位（PFU）数量，以计算并标准化病毒剂量，并相应稀释病毒接种物。
      注意： 本研究中使用了伪狂犬病病毒强毒株（PRVBecker），剂量为 8 x 10⁶ PFU。该剂量已在先前的预实验中优化，以确保所有接种动物在接种后82小时（hpi）均出现临床症状。
   2. 将病毒接种物置于冰上，并在使用前轻轻混匀。
2. 将20 μL病毒接种液（8 x 106 PFU）滴加至擦伤的足垫部位（局部给药）。同时平行进行模拟接种（仅培养基）。
3. 用针头杆部轻轻摩擦10次，以促进病毒吸附。避免用针尖刮擦。每10分钟重复此步骤一次。
4. 将小鼠保持在麻醉状态下30分钟，直至擦伤的足垫干燥。
5. 停止麻醉后，监测小鼠直至其能够维持胸卧位，并将其放入单独的笼具中进行临床随访和取样。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
C57BL/6 小鼠（5-7 周龄）	The Jackson Laboratories
一次性无菌聚苯乙烯培养皿 100 × 15 mm	Sigma-Aldrich	P5731500
杜尔贝科改良伊格尔培养基（DMEM）	Hyclone, GE Healthcare life Sciences	SH30022
杜尔贝科磷酸盐缓冲液 （PBS）溶液	Hyclone, GE Healthcare life Sciences	SH30028
胎牛血清（FBS）	Hyclone, GE Healthcare life Sciences	SH30088
精细弯剪不锈钢	FST	14095-11
Isothesia 异氟烷	Henry Schein	NDC 11695-6776-2
微量离心管 2 ml	Denville Scientific	1000945
微量管 1.5 ml	SARSTEDT	72692005
青霉素/链霉素	Gibco	154022
精密滑动针头 18G	BD	305196