小鼠模型中实验性自身免疫性脑脊髓炎的诱导

Abstract

来源:Schmitz， K. 等人。小鼠多发性硬化症 EAE 模型中视神经炎和脑炎症的生物发光和近红外成像。J. Vis. Exp （2017 年）。

在本视频中，使用实验性自身免疫性脑脊髓炎 （EAE） 建立了多发性硬化症的小鼠模型。向小鼠注射含有神经元肽和佐剂的乳剂，触发激活自身反应性 T 细胞的免疫反应。然后注射百日咳毒素 （PTX） 以增加血脑屏障通透性，使自身反应性 T 细胞浸润大脑。这种浸润启动信号级联反应，最终导致髓鞘损伤，类似于多发性硬化症的脱髓鞘状况。

Protocol

1. SJL/J 小鼠的 EAE 诱导

1. 小 鼠
   1. 使用 11 周龄的雌性 SJL/J 小鼠，让它们在实验室中适应约 7 天。每组使用 n = 10 只小鼠。
   2. 为了评估药物效果，从免疫接种后 3 或 5 天开始，通过饮用水或食物颗粒为对照组连续施用药物和安慰剂（每组 n = 10）。在疾病高峰期，用牛奶或 3% 糖浸泡过的玉米片服用药物或安慰剂。
2. 免疫材料
   1. 使用由抗原（蛋白脂蛋白肽，PLP139-151,1 mg/mL 乳剂）组成的 EAE 诱导试剂盒，在乳液中加入完全弗洛伊德氏佐剂（CFA，热灭活结核分枝杆菌 H37 Ra）和 2 瓶（每瓶 5 μg）冻干百日咳毒素 （PTX）。
   将
   2. PTX （2 μg/mL） 溶解在 1x 磷酸盐缓冲盐水（PBS，即向每个 PTX 管中加入 1.5 mL PBS，充分混合，用相同的移液管吸头去除，然后加入 50 mL 管中的 1 mL PBS）;混合均匀。
3. 免疫
   1. 将 PLP/CFA 分 2 部分皮下注射，每部分 100 μL，均在尾部底部。
   2. 每只小鼠腹膜内 （ip） 注射 100 μL PTX，第一次在免疫后 1 - 2 小时，第二次在 24 小时。
   3. 对于对照小鼠，注射不含 PLP 的 CFA（2 份 100 μL）和不含 PLP 的 PTX。

Materials