小鼠模型中实验性自身免疫性脑脊髓炎的诱导

摘要

来源：Schmitz, K., 等. 小鼠多发性硬化EAE模型中视神经炎和脑部炎症的生物发光与近红外成像。J. Vis. Exp (2017)。

在本视频中，采用实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）建立小鼠多发性硬化模型。将含有神经元肽和佐剂的乳剂注射至小鼠体内，引发免疫反应，激活自身反应性T细胞。随后注射百日咳毒素（PTX）以增加血脑屏障通透性，使自身反应性T细胞得以浸润脑组织。此类浸润启动信号级联反应，最终导致髓鞘损伤，模拟多发性硬化症的脱髓鞘病变状态。

方案

1. SJL/J 小鼠中 EAE 的诱导

1. 小鼠
   1. 使用11周龄的雌性SJL/J小鼠，并让其在实验室内适应约7天。每组使用n = 10只小鼠。
   2. 为评估药物效果，从免疫后第3或第5天开始，通过饮水或饲料颗粒持续向实验组和对照组给予药物或安慰剂（每组n = 10）。在疾病高峰期，通过牛奶或含3%糖水的玉米片给予药物或安慰剂。
2. 免疫材料
   1. 使用一套EAE诱导试剂盒，包含抗原（蛋白脂质蛋白肽段PLP139-151，1 mg/mL乳剂），与完全弗氏佐剂（CFA，含灭活的结核分枝杆菌H37 Ra）乳化混合，以及两瓶冻干百日咳毒素（PTX，每瓶5 μg）。
   2. 将PTX（2 μg/mL）溶解于1×磷酸盐缓冲液（PBS）中（即向每管PTX中加入1.5 mL PBS，充分混匀，用同一移液枪头取出后加入50 mL离心管中的1 mL PBS中），充分混匀。
3. 免疫
   1. 将PLP/CFA乳剂分两部分皮下注射，每部分100 μL，均注射于尾根部。
   2. 每只小鼠腹腔内（i.p.）注射100 μL PTX两次，第一次在免疫后1–2小时，第二次在24小时。
   3. 对于对照组小鼠，注射不含PLP的CFA（两部分，每部分100 μL）以及不含PLP的PTX。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
PLP139-151/CFA 乳剂	Hooke Labs, St Lawrence, MA	EK-0123	EAE 诱导试剂盒
百日咳毒素	Hooke Labs, St Lawrence, MA	EK-0123	EAE 诱导试剂盒
IVIS Lumina Spectrum	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA		生物发光与红外成像系统
LivingImage 4.5 软件	Perkin Elmer, Inc., Waltham, USA	CLS136334	IVIS 分析软件
异氟烷	Abbott Labs, Illinois, USA	26675-46-7	麻醉剂