通过转移水通道蛋白-4特异性Th17细胞在小鼠模型中诱导瘫痪

摘要

来源：Sagan, S. A. 等，特异性识别视神经脊髓炎自身抗原水通道蛋白-4的T细胞在小鼠中诱导瘫痪和视觉系统损伤。J. Vis. Exp. (2017)

本视频展示了通过将靶向水通道蛋白-4的活化Th17细胞转移至小鼠模型来诱导瘫痪的操作过程。在中枢神经系统中，活化的Th17细胞与表达水通道蛋白-4的星形胶质细胞相互作用，引发免疫反应，导致小鼠出现尾部和肢体瘫痪。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

购入8周龄的C57BL/6（H-2^b）雌性小鼠，C57BL/6 AQP4^-/-小鼠由A. Verkman提供。

1. 使用 AQP4 多肽免疫小鼠

1. 制备完全弗氏佐剂（CFA）工作液。​
   1. 使用研钵和研杵将干燥的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，H37Ra）充分研磨成细粉。
   2. 将研磨后的 H37Ra 加入不完全弗氏佐剂中，终浓度为 4 mg/mL。CFA 可在 4 °C 下保存最多 6 个月。
2. 将冻干的抗原（Ag）AQP4 肽溶解于磷酸盐缓冲液（PBS）中，终浓度为 1 mg/mL。保存于 4 °C 或冰上。
3. 准备由两个带鲁尔锁扣的注射器通过三通阀连接组成的装置，用于盛装 CFA/肽乳化液。
   1. 将一个无活塞的玻璃鲁尔锁扣注射器连接至带有两个雄性鲁尔锁扣接口的三通尼龙阀上。通过将阀门手柄转向注射器方向将其关闭。将注射器开口端朝上放置，使其起到试管的作用。将其置于试管架中以增....

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
M. tuberculosis H37Ra	BD Difco	231141	冻干、灭活的 M. tuberculosis
不完全弗氏佐剂	BD Difco	263910
AQP4 肽段 p135-153	Genemed	定制合成	肽段序列：LVTPPSVVGGLGVTMVHGN
AQP4 肽段 p201-220	Genemed / Auspep	定制合成	肽段序列：HLFAINYTGASMNPARSFGP
MOG 肽段 p35-55	Genemed / Auspep	定制合成	肽段序列：MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK
三通旋塞阀	Kimble	420163-4503
HyClone 胎牛血清（经鉴定）	GE Healthcare Life Sciences	SH30071
重组小鼠 IL-23	R&D Systems (BioTechne)	1887-ML
重组小鼠 IL-6	R&D Systems (BioTechne)	406-ML
重组小鼠 IL-12	R&D Systems (BioTechne)	419-ML
百日咳博德特氏菌来源的百日咳毒素	List Biological Laboratories	181
可调流速蠕动泵	Fisher Scientific	13-876-2