通过注射α-突触核蛋白纤维在小鼠中诱导神经炎症

摘要

来源：Breid, S. 等. 在转基因小鼠中外周接种α-突触核蛋白纤维后通过生物发光成像检测神经炎症。J. Vis. Exp. (2017)。

本视频演示了将α-突触核蛋白纤维注射到小鼠体内以诱导神经炎症的过程。这些纤维被注射到表达突变型α-突触核蛋白的转基因小鼠腹腔内。当纤维到达中枢神经系统后，会进入神经元并诱导突变蛋白发生聚集。这些聚集物会扩散至邻近的神经元、小胶质细胞和星形胶质细胞。小胶质细胞识别这些聚集物后被激活，引发神经炎症，从而损伤神经元。

方案

所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。    

1. 动物模型

1. 杂交半合子 Tg(Gfap-luc)^+/-)小鼠（表达萤火虫荧光素酶的转基因小鼠）与半合子Tg(M83^+/-）小鼠（表达携带家族性 A53T 突变的人源 α-突触核蛋白的转基因小鼠）  生成半合子双基因 Tg(M83^+/-Gfap-luc^+/-) 小鼠。
2. 使用实时聚合酶链式反应（PCR）对后代进行基因型鉴定，检测编码人源α-突触核蛋白的转基因是否存在；同时使用常规PCR检测萤火虫荧光素酶。
3. 在六至八周龄时对动物进行接种。

2. 接种物制备

1. 在含有150 mM NaCl的20 mM Tris-HCl（pH 7.2）Tris缓冲盐水（TBS）中制备带有A53T突变的单体重组人源α-突触核蛋白。
2. 通过在800 rpm、37 °C条件下，于旋转摇床中振荡3 µg/µL的单体重组人源α-突触核蛋白5天，制备用于接种的纤维状α-突触核蛋白。
3. 将纤维聚集体用磷酸盐缓冲液（PBS）稀释，使腹腔接种时终浓度达到1 µg/µL。
4. 在冰上使用探头式超声仪对α-突触核蛋白纤维进行超声破碎，设置为50%振幅，每次0.5秒，共40次脉冲，每次脉冲间隔1秒，总时长1分钟。为避免交叉接种污染，制备不同接种物时应使用洁净的超声探头。

3. 腹腔注射

1. 进行腹腔注射时，将动物置于麻醉舱中，以2 L/min的流速和2%的蒸发器设置，通过吸入异氟烷/氧气进行短暂麻醉。轻捏动物的脚趾，确认其后肢无回缩反应，以确保麻醉效果充分。
2. 用50 µL经超声处理的α-突触核蛋白纤维或PBS填充一支27 G的一次性皮下注射针筒。
3. 将小鼠保持在背侧朝上的体位，头部远离操作者并向下倾斜约45°，直接将药物注入腹膜腔，注意避免穿刺到位于腹壁后方的小肠或盲肠。持续监测动物，直至其从麻醉中恢复。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
磷酸盐缓冲液（PBS）	Invitrogen	14190169
27号针头注射器	VWR	613-4900
异氟烷	Piramal Healthcare	PZN 4831850
Sonopuls Mini20 超声波破碎仪	Bandelin	3648
Tg(M83+/-) 小鼠或 B6;C3-Tg(PrnpSNCA*A53T)83Vle/J 小鼠	杰克逊实验室	4479