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在小鼠模型中制造皮层刺伤以诱导反应性星形胶质细胞增生

2025年7月8日

本文内容

摘要

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来源：Allahyari, R. V. 等 诱导反应性胶质增生 体内 通过前脑刺伤损伤。 视频实验杂志 (2015)

本视频演示了小鼠皮层刺伤损伤的操作过程，包括颅骨暴露和脑损伤的建立。该模型可诱导反应性星形胶质细胞增生，即星形胶质细胞的一种神经保护性反应，用于研究中枢神经系统创伤、炎症及修复机制。

方案

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所有涉及动物模型的操作均已经过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审核。

1. 手术前小鼠的准备

  1. 将小鼠从饲养笼中取出并称重（g）。
  2. 将小鼠放入异氟烷诱导室，设置氧气流速为 2 L/min，异氟烷蒸发器浓度为 5%，以诱导外科麻醉状态，约需 3–5 分钟。观察呼吸减慢和运动停止，并通过脚趾夹捏反射确认小鼠已完全麻醉。
  3. 当小鼠完全麻醉后，将其固定于立体定位仪中，将鼻部置入与异氟烷管路相连的鼻锥内；将耳杆插入耳道并拧紧，确保头部稳定。
  4. 剃除从一侧耳至另一侧耳、以及从两眼之间向后至耳后的头部毛发。
  5. 使用异丙醇和聚维酮碘溶液交替擦拭消毒皮肤，每种溶液各擦拭三次。
  6. 在双眼表面涂抹人工泪液，以防止手术过程中角膜干燥。

2. 手术操作

  1. 通过捏压小鼠脚趾或尾巴来监测麻醉深度。当小鼠无反应且呼吸缓慢均匀时，表明其已达到适当的手术麻醉平面。
  2. 使用11号手术刀片，从眼睛后方开始，沿一条坚定的单一切口动作，向接近两耳之间位置做矢状旁切口。将皮肤拨开，并用止血钳夹住右侧固定。
  3. 使用11号手术刀片的钝面和棉签清除颅骨表面的覆盖膜。可选步骤：用浸有0.9%生理盐水的棉签擦....

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结果

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显示前囟、人字缝及神经解剖学研究手术区域尺寸的颅骨示意图。
图1：小鼠颅骨示意图，显示颅骨开窗区域。 蓝线表示最初标记的钻孔区域边界。上方和左侧标记点分别位于冠状缝下方或矢状缝外侧1 mm处。下方和右侧标记点分别距离冠状缝和矢状缝4 mm。通过在标记范围内钻出一个圆形区域（虚线），形成直径约3 mm的颅骨开窗（虚线）。该示意图未按比例绘制。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
立体定位仪Harvard Apparatus726049
高速微型钻Harvard Apparatus724950
不锈钢手术刀片，#11MedVetJOR581S
5/45 角度镊子Fine Science Tools11251-35
明胶海绵，12 cm × 7 mmFisherNC9841478
抗体及其他试剂制造商目录编号明场稀释比例
荧光稀释比例
兔抗 GFAP 抗体DAKOZ033429-21:20,000
1:1,000
羊抗 BrdU 抗体Abcamab18931:2,000
1:500
生物素标记的山羊抗兔 IgGVector LaboratoriesBA-100007:40
生物素标记的兔抗羊 IgGVector LaboratoriesBA-600007:40
Alexa Fluor 488 标记山羊抗兔 IgGLife TechnologiesA-1100807:40
Alexa Fluor 568 标记驴抗羊 IgGLife TechnologiesA-2109917:40
DAPI 核酸染色剂Life TechnologiesD357117:40
醋酸克雷斯尔紫Sigma AldrichC5042-10G1%

重印与许可

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