使用侧向液体冲击装置建立小鼠创伤性脑损伤模型

摘要

来源：Wen, L., 等 研究小鼠创伤性脑损伤后盲肠微生物群的变化。J. Vis. Exp. (2019)。

该视频演示了一种使用侧向液体脉冲装置（LFPI）建立小鼠创伤性脑损伤（TBI）模型的方法。在对小鼠实施麻醉后，通过在颅骨上开窗暴露脑组织。将充满生理盐水的套管连接至颅骨窗，并与LFPI装置相连。释放装置的摆锤以产生压力脉冲，从而造成创伤性脑损伤。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 动物护理

1. 本实验使用5至6周龄的雄性C57BL/6J小鼠（体重20–25 g）。
2. 将小鼠维持在12小时光照/12小时黑暗的循环条件下，并确保其自由摄食和饮水。在整个研究期间，假手术组和TBI组小鼠应给予相同量的食物和水。
3. 应尽一切努力减少动物的疼痛与不适。

2. 创伤性脑损伤的诱导

1. 腹腔注射氯胺酮（80-100 mg/kg）/赛拉嗪（10 mg/kg）进行麻醉。通过眼反射或痛觉反射检测麻醉深度。使用人工泪液或润滑性眼膏防止眼睛干燥。
2. 麻醉后，将小鼠置于俯卧位。使用温度控制加热垫在手术期间以及创伤性脑损伤（TBI）后30分钟内维持体温在37 °C。
3. 剃除切口区域的毛发。
4. 使用70%乙醇进行三次交替擦拭消毒头皮，然后在矢状面上切开头皮。
5. 使用镊子将切口两侧拉开，并轻微分离骨膜。
6. 用标记笔在颅骨右侧顶骨区域画一个直径为3 mm的圆，距离中线2 mm。
7. 使用电动钻钻开颅骨。操作时务必小心，避免损伤硬脑膜。
8. 移除骨瓣，暴露一个直径为3 mm的小骨窗。
9. 将一根塑料损伤套管（内径 = 2.5 mm，长度 = 8 mm）置于颅骨开窗处，并使用牙科丙烯酸树脂将套管固定在颅骨上。
10. 使用注射器（5 mL）将无菌0.9% NaCl（生理盐水）注入套管中，确保套管内无气泡。
11. 打开示波器和放大器，确保LFPI装置的高压管路中无气泡。通过释放约10次脉冲测试设备，直至获得稳定信号。调整摆锤起始位置的角度，使脉冲强度达到约2.0 atm。
12. 将损伤套管连接至LFPI装置。通过拉动触发器释放摆锤以诱导脑损伤，随后将脉冲通过整个封闭的液体填充管路系统传递至硬脑膜。
13. 对假手术组小鼠执行相同的外科手术操作，但不实施LFPI。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
加热垫	上海 SAFE 生物科技有限公司	TR-200	加热垫
注射器	浙江大学医学院附属第一医院		注射器
LFPI 装置	弗吉尼亚 英联邦大学	FP302	LFPI 装置
微型颅骨钻	RWD生命科学	78061	微型颅骨钻
聚维酮碘	浙江大学医学院附属第一医院		聚维酮碘