使用侧向液体叩击装置生成创伤性脑损伤的小鼠模型

摘要

来源:温， L.， et al. 调查小鼠创伤性脑损伤后盲肠微生物群的改变。 （2019 年）。

该视频演示了一种使用侧向液体叩击装置 （LFPI） 生成创伤性脑损伤 （TBI） 小鼠模型的方法。麻醉小鼠后，通过在头骨上创建一个窗口来暴露大脑。将充满盐水的套管连接到窗户上，然后连接到 LFPI。装置的钟摆被释放以产生压力脉冲，从而造成创伤性脑损伤。

方案

所有涉及动物模型的程序均已由当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会审查。

1. 动物护理

1. 在本实验中使用 5 至 6 周龄雄性 C57BL/6J 小鼠 （20-25 g 体重）。
2. 保持小鼠处于 12 小时/12 小时的光照/黑暗循环中，并确保它们随意接受食物和水。在整个研究过程中为假手术组和 TBI 组提供相同数量的食物和水。
3. 尽一切努力减少动物的痛苦和不适。

2. 创伤性脑损伤的诱发

1. 注射氯胺酮 （80-100 mg/kg）/甲苯噻嗪 （10 mg/kg） IP 用于麻醉。使用眼反射或疼痛反射测试麻醉深度。使用人工泪液或润滑眼膏以防止眼睛干燥。
2. 麻醉后，将鼠标置于俯卧位。使用温控加热垫在手术期间和 TBI 后将温度保持在 37 °C，持续 30 分钟。
3. 剃掉切口区域的毛发。
4. 用 70% 乙醇对头皮进行消毒，使用三种交替的磨砂膏，然后在矢状面上切开头皮。
5. 用镊子缩回两侧的切口，并稍微分离骨膜。
6. 用记号笔在颅骨的右顶叶区域画一个圆圈（直径 3 毫米），距离中线 2 毫米。
7. 用电钻钻头骨。确保仔细作此步骤以保护硬脑膜免受损坏。
8. 取下骨瓣并露出一个小骨窗（直径 3 毫米）。
9. 在开颅手术上放置一个塑料损伤套管（内径 = 2.5 毫米，长度 = 8 毫米），并使用牙科丙烯酸将套管粘接到颅骨上。
10. 使用注射器 （5 mL） 用无菌 0.9% NaCl（生理盐水）填充套管，以确保套管中没有气泡。
11. 打开示波器和 amp升压器，确保 LFPI 设备的高压管没有气泡。通过传递大约 10 个脉冲来测试设备，直到它发出稳定的信号。调整摆锤起始位置的角度，以达到约 2.0 atm 的脉冲强度。
12. 将损伤套管连接到 LFPI 装置。通过扣动扳机并释放钟摆来诱发脑损伤。然后，获得脉冲并通过整个封闭的充满液体的管道系统将其传输到硬脑膜。
13. 用相同的手术程序作假手术组中的小鼠。请勿执行 LFPI。

材料