通过Cre-LoxP介导在小鼠模型中诱导脑海绵状血管畸形

摘要

来源：Choi, J. P.，等。小鼠模型中脑海绵状血管畸形的诱导与微型CT成像。J. Vis. Exp. (2017)

在本视频中，使用了一只经过基因改造的幼鼠，其Ccm2基因两侧带有loxP位点，并融合了雌激素受体的Cre重组酶，用于诱导脑海绵状血管畸形（CCMs）。通过给予4-羟基他莫昔芬激活内皮细胞中的Cre，导致Ccm2基因被删除，从而在脑内形成CCMs。

方案

所有涉及动物模型的操作均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 小鼠模型中脑海绵状血管畸形（CCM）的诱导

1. 将 Cdh5-CreErt2; Ccm2fl/fl 小鼠与 Ccm2fl/fl 小鼠杂交，以获得含有 Cdh5-CreErt2; Ccm2fl/fl（Ccm2iECKO）幼鼠及其同窝对照（Ccm2fl/fl）的子代。Cdh5-CreErt2 和 Ccm2fl/fl 动物此前已有描述19。
2. 将 4HT 溶解于 100% 乙醇中，并以每份 30 µL 分装（4-羟基他莫昔芬（4HT），浓度：10 mg/mL），于 -80 °C 保存。使用当天，将分装的 4HT 用玉米油稀释至 0.5 mg/mL。
3. 使用胰岛素注射器，对出生后第1天（P1）的新生幼鼠进行胃内注射 50 µL 4HT（0.5 mg/mL），以诱导实验性 CCM 病变。

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
4-羟基他莫昔芬	Sigma-Aldrich	H6278	用于激活 Cdh5-CreErt2
玉米油	Sigma-Aldrich	C8267-500ML	用于稀释 4-羟基他莫昔芬
胰岛素注射器