来源：Pösel, C.，等。小鼠缺血性脑组织中免疫细胞的分离与流式细胞术分析。J. Vis. Exp. (2016)
本视频演示了通过酶消化法从小鼠缺血脑组织中分离脑细胞和浸润的免疫细胞的实验步骤，随后利用密度梯度离心去除细胞碎片和髓鞘，以用于脑卒中研究中的炎症反应分析。
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方法文章
从小鼠缺血性脑组织获取细胞悬液
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2025年7月8日
本文内容
摘要
方案
所有涉及动物样本的实验程序均已通过相应的动物伦理审查委员会的审查和批准。
1. 试剂的准备
- 消化缓冲液（每半脑1 ml）：溶解含有纯化消化酶的标准化混合物， 例如， 低热解酶浓度的Liberase（TL），用含钙（Ca）和镁（Mg）的Hanks平衡盐溶液（HBSS）配制至浓度为2 U/ml。
- 含DNA酶的洗涤缓冲液：将DNA酶I溶解于不含钙/镁（Ca/Mg）的HBSS中，终浓度为666 U/ml，并加入10%胎牛血清（FCS）。
- 不含DNA酶的洗涤缓冲液：含10% FCS的HBSS（无Ca/Mg）。
- 密度梯度介质（每半脑5 ml）：通过将九份密度梯度介质与一份1.5 M氯化钠混合，配制等渗密度梯度介质原液（SIP；100%）。取适量SIP，加入含3%胎牛血清（FCS）的HBSS（无钙镁），稀释至25%密度。
2. 将脑组织解离为单细胞悬液
- 用干净的剃须刀片小心去除脑干和小脑。使用干净的剃须刀片将脑组织沿中线切开分为左右两半，并将每侧半球沿冠状面切成大小大致相等的三块。
- 使用5 ml注射器的推杆端，将每侧半脑的解剖组织通过100 µm细胞滤筛进行研磨。持续用冰浴的H....
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| MACSmix 试管旋转仪 | Miltenyi Biotec GmbH | ||
| Heraeus Multifuge 3SR+ | Thermo Scientific | ||
| Hank's 平衡盐溶液 (HBSS) | Gibco/Life Technologies GmbH | 14175-129 | |
| 含钙/镁的 HBSS | Gibco/Life Technologies GmbH | 24020-091 | |
| Liberase TL | Roche Diagnostics GmbH | 5401020001 | 在室温下使用 |
| Percoll Plus | GE Healthcare Europe GmbH | 17-5445-01 | |
| 胎牛血清 | PAN Biotech | 3302-P101003 | |
| 台盼蓝 | Gibco/Life Technologies GmbH | 15250-061 | |
| Trucount | BD Biosciences | 340334 | |
| 磷酸盐缓冲液 | Biochrom AG | L 182-10 | |
| DNase I | Roche Diagnostics GmbH | 11284932001 | |
| 硅胶管，1米 | World precision instruments | 503022 | |
| 精细虹膜剪刀（尖/钝） | Fine Science Tools | 14028-10 | |
| 直头 1×2 齿镊子 | Fine Science Tools | 11021-14 | |
| 钝头镊子 | Fine Science Tools | 11008-13 | |
| 5 ml 注射器推杆 | Carl Roth GmbH (Braun) | EP96.1 | |
| 细胞筛，100 µm | Dr. I. Schubert, BD | 2360-00 | |
| Omnican Fine 剂量注射器 1 mL | Braun | TBD | |
| 细胞筛，70 µm | Greiner Bio-One GmbH | 542 070 | |
| 移液管，10 ml | Greiner Bio-One GmbH | 607180 | |
| 移液管，10 ml | Sarstedt AG&Co | 86,12,54,025 | |
| 移液管，25 ml | Greiner Bio-One GmbH | 760180 | |
| 移液管，5 ml | Greiner Bio-One GmbH | 606180 | |
| 移液管，25 ml | Sarstedt AG&Co | 86,16,85,020 | |
| 移液管，5 ml | Sarstedt AG&Co | 86,12,53,025 | |
| 吸头，0.1–10 µl | Corning B.V. Life Sciences | 4840 | |
| 吸头，100–1000 µl | Greiner Bio-One GmbH | 740290 | |
| 吸头，10–200 µl | Greiner Bio-One GmbH | 739296 | |
| 反应管，1.5 ml | Greiner Bio-One GmbH | 616201 | |
| 反应管，2 ml | Greiner Bio-One GmbH | 623201 | |
| 细菌培养皿，94×16 mm | Greiner Bio-One GmbH | 633180 | |
| Falcon 15 ml | Greiner Bio-One GmbH | 188271 | |
| Falcon 50 ml | VWR International GmbH (BD) | 734-0448 | |
| Neubauer 血细胞计数板 | Biochrom AG | PDHC-N01 | |
| 剃刀刀片 | Carl Roth GmbH | CK07.1 |
