通过血管内穿刺法在小鼠模型中诱导蛛网膜下腔出血

摘要

来源：Liu, S., 等. 蛛网膜下腔出血的血管内穿孔模型结合磁共振成像（MRI）。J. Vis. Exp. (2021)。

本视频展示了通过血管内穿刺法在小鼠模型中诱导蛛网膜下腔出血的操作过程。对麻醉后的小鼠颈部区域进行切口，以暴露颈总动脉及其分叉部位。将一根细丝经动脉插入，穿刺颅内动脉分支，从而诱导蛛网膜下腔出血。

方案

所有涉及动物模型的实验程序均已通过当地机构动物护理委员会和 JoVE 兽医审查委员会的审核。

1. 动物准备

1. 通过腹腔注射氯胺酮（70 mg/kg）和赛拉嗪（16 mg/kg）诱导麻醉。维持正常体温有助于快速进入深度麻醉状态。使用疼痛刺激（如脚趾夹捏）测试镇静程度，并确认无反应。
2. 用剃刀小心剃除小鼠颈部毛发，依次用70%乙醇和聚维酮碘/氯己定清洁皮肤，并在皮肤表面涂抹1%利多卡因以进行局部镇痛。
3. 将小鼠置于仰卧位，用胶带固定四肢和尾巴，轻柔地将颈部皮肤向手术对侧拉伸，同时轻微抬高颈部。
4. 使用眼用软膏（例如5%泛醇）防止术中眼睛脱水。

2. 蛛网膜下腔出血（SAH）诱导

1. 使用无菌手术刀从下巴至胸骨上缘（约1.5 cm）切开颈部皮肤，并钝性分离唾液腺与其周围结缔组织。
2. 分离气管一侧的肌群（本例为右侧），暴露被营养性血管和小静脉覆盖的颈总动脉（CCA）鞘。颈总动脉与神经彼此紧邻。
3. 游离颈总动脉，并在其周围预留一根8-0丝线缝线，暂不结扎。注意保护迷走神经，因其易受损伤（图1A）。
4. 在分离区域的下后三分之一处可见颈总动脉、颈内动脉（ICA）和颈外动脉（ECA）的三分叉结构。解剖ECA远端，并在其尽可能远的位置双重结扎血管。
5. 在双重结扎段的中点切断ECA，形成血管残端。
6. 预先在ECA残端处安置一根用于栓线的结扎线，待成功插入栓线后再行收紧。
7. 使用缝线或微型夹暂时阻断ICA和CCA（图1B）。
8. 用显微血管剪在ECA上做一小切口（约ECA直径的一半），将5-0（或可选4-0）聚丙烯栓线插入ECA并向前推进至CCA。
9. 轻微收紧ECA上的结扎线，同时松开ICA和CCA上的微型夹（图1C）。
10. 轻柔回拉栓线，并将ECA残端向头侧调整，使栓线经三分叉处进入ICA内翻入（图1D）。
11. 将栓线尖端朝向内侧，与气管中线成约30°角，与水平面亦成约30°角，沿ICA向前推进。当到达前 cerebral 动脉（ACA）与中 cerebral 动脉（MCA）分叉处时会遇到阻力（约9 mm）。
12. 继续向前推进栓线3 mm，穿破右侧ACA。迅速将栓线撤回至ECA残端，使血液流入蛛网膜下腔。
13. 保持栓线在此位置约10秒（图1E）。肌肉震颤、同侧瞳孔缩小、呼吸急促、心律改变及尿失禁等表现可作为手术成功的辅助证据。
14. 暂时关闭CCA以避免过多失血。立即拔出栓线，并用预先安置的缝线结扎ECA。重新开放CCA，恢复灌注并进一步促使血液流入蛛网膜下腔（图1F）。
15. 检查有无出血渗漏后，对伤口周围皮肤进行消毒，以预防术后皮肤感染，并使用不可吸收的4-0聚酯纤维缝线缝合伤口。
16. 将小鼠置于保温箱中直至意识恢复。等待动物完全清醒，并确认其已恢复足够意识以维持胸卧位。在完全恢复前，不得将其放回与其他小鼠同笼饲养。
17. 术后给予对乙酰氨基酚200–300 mg/kg体重，用于缓解疼痛。
18. 术后每日观察小鼠状况。

结果

图1：手术技术的分步图示。（A）暴露的右侧颈总动脉解剖结构示意图：可见颈总动脉（CCA）及其分叉为颈内动脉（ICA）和颈外动脉（ECA），以及颈外动脉的小分支（OA 和 STA）。（B）将颈外动脉从周围组织中游离，并用两根缝线结扎，然后将其切断。需在分叉附近松松地放置第三根结扎线，但不得阻断血流。（C）暂时阻断颈内动脉和颈总动脉（通过结扎或夹闭），以防止颈外动脉被小心切开时大量出血。（D）将线栓插入颈外动脉，并向前推进至颈总动脉。必须小心收紧预先布置的结扎线，以防止血液渗出，同时仍允许线栓继续前进。（E<...

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
眼霜	Bayer	815529836	Bepanthen
结扎缝合线（5-0）	SMI		Silk black USP
显微镜光源	Zeiss	CL 6000 LED
氯胺酮	CP-pharma	797-037	100 mg/mL
对乙酰氨基酚（40 mg/mL）	bene Arzneimittel	4993736
普罗琳单丝缝线（5-0）	Erhicon	EH7255
剃刀	Wella	HS61
外科器械（精细剪刀）	FST	14060-09
外科器械（镊子#1）	AESCULAP	FM001R
外科器械（镊子#2）	AESCULAP	FD2855R
外科器械（镊子#3）	Hammacher	HCS 082-12
外科器械（持针器）	FST	91201-13
外科器械（Vannas弹簧剪）	FST	15000-08
手术显微镜	Zeiss	Stemi 2000 C
创伤缝合线（4-0）	Erhicon	CB84D
赛拉嗪	CP-pharma	797-062	20 mg/mL